EZ ECL 化學發(fā)光液（普通型）

產(chǎn)品描述
EZ ECL 化學發(fā)光液（普通型）是一款常規(guī)靈敏度的化學發(fā)光(ECL)HRP底物,，可幫助用戶在免疫印跡分析過程中實現(xiàn)10pg的蛋白檢測(~1×10^-11g),，極其節(jié)省抗體,。EZ ECL 底物可為使用辣根過氧化物酶(HRP)偶聯(lián)物的免疫印跡實驗提供明亮的信號和皮克級檢測靈敏度。該底物能夠兼容各種膜,、封閉液和寬范圍抗體稀釋液,，以出色性能、通用性和高性價比,，滿足用戶的免疫印跡應用需求,。
EZ ECL 底物的特點：
• 常規(guī)靈敏度：檢測硝化纖維素膜或PVDF膜上10pg的蛋白條帶。,。
• 長信號持續(xù)時間：在條件優(yōu)化情況下,，經(jīng)底物孵育的印跡條帶能夠持續(xù)輸出 6~8 h 的可檢測光信號。
• 試劑穩(wěn)定：試劑盒在室溫下可穩(wěn)定放置長達6個月,，4℃條件下存放1年不影響使用,。
建議稀釋濃度：
• 一抗?jié)舛龋航ㄗh以1mg/mL儲備液起1:1,000-1:5,000 或 0.2-1ug/mL
• 二抗?jié)舛龋航ㄗh以1mg/mL儲備液起1:5,000-1:20,000 或 2.5-10ng
訂購信息

產(chǎn)品組分

運輸與保存
藍冰運輸。4℃避光干燥保存,，有效期12個月,。
使用方法

1. 取出印記膜,，加入合適的封閉液在溫室下孵育20~60min，同時振蕩,，以封閉膜上非特異性蛋白結(jié)合位點,。

2. 將膜從封閉液中取出，與一抗工作液在溫室孵育1 h,，同時振蕩,；或在28℃ 孵育過夜，不振蕩,。

3. 將足量的洗滌緩沖液加至膜上,，保證緩沖液將膜覆蓋。振蕩孵育≥5 min,，更換洗滌緩沖液并重復該步驟4~6次,。增加洗滌緩沖液體積，洗滌次數(shù)和洗滌時間有助于降低背景信號,?！咀ⅰ浚孩俜跤埃ぴ谙礈炀彌_液中的短暫淋洗會提高洗滌效率,。②按前文建議的HRP標記二抗稀釋度非常重要的,。

4. 將HRP標記的二抗工作液與膜在溫室孵育1 h，同時振蕩,。

5. 重復步驟3,，以除去未結(jié)合的HRP標記二抗?！咀ⅰ浚耗づcHRP標記二抗孵育后必須進行洗滌,。

6. 將A溶液與B液等比例混合，制備成工作液,。每cm²膜使用0.01~0.1 mL工作液,，工作液可以在溫室下穩(wěn)定8 h,?！咀ⅰ浚罕┞队谌展饣蚱渌麖姽庀驴赡軗p害工作液，為獲得最佳結(jié)果,，請將此工作液保存在琥珀色瓶中光,；實驗室的常見照明不會損害工作液。

7. 將印記膜在工作液中孵育5 min,。從工作液中取出印記膜,，并置于一個塑料片或清潔的塑料紙（膜）中，用一張吸水紙吸除多余的液體,，并從印記和塑料紙之間小心地壓出氣泡,。

8. 將包在塑料紙（膜）中的印記膜置于膠片暗盒中,，蛋白質(zhì)面朝上，除適用于膠片曝光的燈（如紅色安全燈）之外,，關(guān)閉所有的燈,。【注】：①膠片必須在曝光期間保持干燥,；②確保將多余的底物從膜和塑料紙上去除,；③在整個膠片處理期間，使用手套,。

9. 將X光膠片置于膜的上面,。建議第一次曝光60 s。之后可調(diào)整曝光時間以達到最佳結(jié)果,?；瘜W發(fā)光反應在底物孵育后的前5~30 min期間是烈的。這一反應可以持續(xù)幾個小時,，但強度會隨時間下降,，如有底物孵育后較長時間后曝光，曝光時間可能需要延長以獲得較強信號,。如果使用磷光存儲成像設備（如Bio-Rad的分子成像儀系統(tǒng)）或CCD照相機可能需要較長的曝光時間,。【注】：膠片與膜之間的任何移動可能在膠片上造成人為的非特異信號,。

10. 使用合適的顯影劑和定影劑對膠片進行顯影,。如果信號太強，則縮短曝光時間或?qū)⒂∮浤みM行剝離并降低抗體濃度重新檢測,。

注意事項

1. 本產(chǎn)品僅限于科學實驗研究使用,，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域,。

2. 為獲得最佳效果,，必須優(yōu)化該系統(tǒng)的全部組分，包括樣品量,、一抗和二抗?jié)舛纫约澳ず头忾]試劑的類型,。該底物極其敏感，自測李記底物正常使用比大多數(shù)他牌底物少得多的樣品,、一抗,、二抗。

3. 使用本產(chǎn)品比使用沉淀比色HRP底物檢測所需的抗體濃度低,。為優(yōu)化抗體濃度,，請進行一次系統(tǒng)的點印跡分析。

4. 沒有一種封閉試劑對所有系統(tǒng)而言都是最佳的,，所以為每一個免疫印跡檢測系統(tǒng)找到最合適的封閉緩沖液非常必需,。封閉試劑有可能與抗體產(chǎn)生交叉反應,，導致出現(xiàn)非特異性信號。封閉緩沖液同時也會影響系統(tǒng)的靈敏性,。當從一種底物轉(zhuǎn)換為另一種底物時,，有時會出現(xiàn)信號衰減或背景增加的現(xiàn)象，原因可能是封閉緩沖液不適合新的檢測系統(tǒng),。

5. 使用親和素/生*素檢測系統(tǒng)時,，避免使用牛奶作為封閉試劑，因為牛奶中含有不定量的內(nèi)源性生*素,，會導致高背景信號,。

6. 保證洗滌緩沖液、封閉緩沖液,、抗體溶液和底物工作液的使用體積,，以確保在整個實驗過程中印跡膜被液體覆蓋，避免膜變干,。增大封閉緩沖液及洗滌緩沖液的使用量可以降低非特異性的信號,。

7. 為獲得最佳效果，在孵育步驟請使用搖床,。

8. 將Tween20(終濃度0.05~0.1%)加入封閉緩沖液和稀釋的抗體溶液,，以降低非特異信號。使用高品質(zhì)的產(chǎn)品,，如去污劑,。它保存在安瓿中，過氧化物和其他雜質(zhì)含量很低,。

9. 不要使用疊氮鈉作為緩沖液的防腐劑,。疊氮鈉是HRP的抑制。

10. 避免手與膜直接接觸,，實驗過程應戴手套或使用干凈的鑷子,。

11. 所有設備必須清潔且不沾染外來物質(zhì)。金屬器械（如剪刀）不得具有可見的銹跡,。銹跡可能導致斑點形成和高背景,。

12. 底物工作液在室溫下可穩(wěn)定8 h。日光或任何其他強光下可能損害底物,，為獲得最佳結(jié)果,，將底物工作液保存在琥珀色瓶中，并避免長期暴漏在任何強光下,，短時間暴漏于實驗室常規(guī)照明不會損害該工作液。

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