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Protein G磁珠通常用于將抗體與血清,、細(xì)胞培養(yǎng)上清或腹水分離，以及利用免疫沉淀和共同免疫沉淀從細(xì)胞或組織提取物中分離抗原的蛋白質(zhì),。Protein G 磁性珠含有重組蛋白 G,，可以特異性結(jié)合小鼠,、人類、兔子,、牛,、山羊和綿羊等多種種屬來源的抗體，使其成為研究和凈化免疫球蛋白的更通用,、更方便的工具,。

產(chǎn)品優(yōu)勢

具有高效的蛋白結(jié)合能力。

超低非特異性吸附的性能,。

配合磁力架操作省時,、簡便、溫和,。

產(chǎn)品穩(wěn)定性高,。

訂購信息

常溫運(yùn)輸。4℃保存,，有效期 24 個月,。

技術(shù)參數(shù)

貼壁細(xì)胞樣品

移去培養(yǎng)基,，用 PBS 洗細(xì)胞兩次。

收集細(xì)胞至 1.5 mL EP 管內(nèi),，按比例加入 IP Lysis/Wash Buffer,，同時加入 PMSF 等相應(yīng)的抑制劑，混勻后置于冰上靜置 5-20 min（期間混勻幾次）,。

4 ℃, 12000-16000 g,10 min 離心收集上清液,，置于冰上以備后續(xù)實驗（或置于-80 ℃長期保存）。

表 1.培養(yǎng)皿 IP Lysis/Wash Buffer 推薦使用體積

懸浮細(xì)胞樣品

4℃,、500-1000 g,、10 min，收集細(xì)胞,，棄上清,。

用 PBS 洗細(xì)胞一次，即用 PBS 將細(xì)胞團(tuán)重懸,，4℃,、500-1000 g、10 min,，收集細(xì)胞,，棄上清,。

用預(yù)冷的 IP Lysis/Wash Buffer 重懸細(xì)胞,。每 50mg 細(xì)胞使用 500μL IP Lysis/Wash Buffer。同時加入 PMSF 等相應(yīng)的抑制劑，混勻后置于冰上靜置 5-20 min（期間混勻幾次）,。

4 ℃, 12000 -16000 g,10 min 離心收集上清液,，置于冰上以備后續(xù)實驗（或置于-80 ℃長期保存）。

血清樣品

一般建議建議用 IP Lysis/Wash Buffer 稀釋血清樣品至目標(biāo)蛋白終濃度為 50~150 µg/mL,，置于冰上備用（或置于-20 ℃長期保存）,。

免疫復(fù)合物的制備

【注】：樣品所需的量和孵育時間均依賴于每個特定的抗體-抗原體系，因而可能需要優(yōu)化才能得到最大產(chǎn)量,。

以下實驗方案針對 2-10μg 親和純化的抗體,，根據(jù)需要可以按比例放大。

在離心管中,，將每個樣品的細(xì)胞裂解液與 2-10μg 免疫沉淀抗體結(jié)合,。每個免疫沉淀反應(yīng)推薦的總蛋白量為 500-1500μg。

用 IP Lysis/Wash Buffer 將抗體以及制備好的樣品稀釋至 300-500μL,。

在室溫下孵育 1-2 h,，或 4 ℃過夜，以形成免疫復(fù)合物,。

免疫沉淀

【注】：為保證磁珠均勻分布,，使用前通過反復(fù)顛倒或輕微渦旋混勻瓶中磁珠。

1.將 25µL(0.25 mg)的 Protein G Magnetic Beads 加入 1.5 mL 離心管中,。

2.向磁珠中加入 500 µL 預(yù)冷 PBS,，輕柔混勻。

3.將離心管放入磁力架中收集磁珠到離心管的一邊,。去除上清,。

4.向離心管中加入 200-500 µL IP Lysis/Wash Buffer。顛倒離心管數(shù)次或輕微渦旋混勻 1min,。用磁力架收集磁珠,。去除上清。

5.將抗原樣品/抗體混合物加入裝有磁珠的離心管中,，保持混勻室溫下孵育 1-2 h,。

6.用磁力架收集磁珠，除去未結(jié)合的樣品,，保存以備分析,。

7向離心管中加入 500 µL IP Lysis/Wash Buffer，輕柔混勻,。收集磁珠,，棄上清。再重復(fù)洗兩次,。

變性洗脫：向離心管中加入 80-100 µL SDS-PAGE Sample Loading Buffer（1×）,，將樣品置于 100℃水浴或者金屬浴中加熱 10 min,。通過磁力架分離磁珠，保留含有目的抗原的上清,。

【注】：如需保持蛋白活性,，也可采用以下洗脫方式。

低 pH 洗脫：向離心管中加入 100 µL Elution Buffer,。保持混勻在室溫下孵育離心管 5-10 min,。通過磁力分離磁珠，保留含有目的抗原的上清,。每 100 µL 洗出液中加入 20 µL Neutralization Buffer 來中和低 pH,。

注意事項

1.本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實驗研究使用，不得用于臨床診斷,、治療等領(lǐng)域,。

2.請勿高速離心、干燥或冷凍磁珠,，這些操作會導(dǎo)致磁珠聚集而降低結(jié)合能力,。

3.IP 實驗中不同類型的抗體與抗原結(jié)合的親和性是有區(qū)別的，抗體與抗原結(jié)合還會受到 IP Lysis/WashBuffer 的影響,，因此,，如使用本實驗步驟不能獲得最佳的實驗結(jié)果，可自行優(yōu)化操作細(xì)節(jié)或者篩選及配制緩沖液進(jìn)行實驗,，推薦使用李記生物的相關(guān)產(chǎn)品,，參照相關(guān)產(chǎn)品推薦。

4.磁珠使用前應(yīng)充分振蕩均勻,。磁珠應(yīng)保存在儲存溶液中,，防止干燥。

附錄：蛋白 A 與不同種類的 Ig,，s 及其亞類的結(jié)合強(qiáng)度