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貨物所在地：上海上海市
更新時(shí)間：2024-10-30 21:00:07
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Protein G瓊脂糖凝膠通常用于從血清,、細(xì)胞培養(yǎng)上清或腹水中分離抗體,，以及從細(xì)胞或組織提取物中分離抗原進(jìn)行免疫沉淀和免疫共沉淀。蛋白G瓊脂糖偶聯(lián)高質(zhì)量的重組蛋白G,，它可以結(jié)合抗體的IgG結(jié)合域,這些結(jié)構(gòu)域可以與許多不同物種的抗體結(jié)合,，包括小鼠、人,、兔,、豬、狗和貓,。
訂購信息
產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) | 規(guī)格 | 價(jià)格 |
Protein G瓊脂糖凝膠 | AP64L223 | 1 mL | 400 |
運(yùn)輸與保存
常溫運(yùn)輸,。4℃保存，有效期24個(gè)月,。
技術(shù)參數(shù)
介質(zhì) | 4%高度交聯(lián)的瓊脂糖微球 |
大小 | 30-100um |
濃度 | 25% |
結(jié)合力 | ≥ 6 mg human IgG/mL of beads |
適用范圍 | IP,，CoIP, ChIP |
使用方法
懸浮細(xì)胞樣品
1.4℃、500-1000 g,、10 min,，收集細(xì)胞，棄上清,。
2.用PBS 洗細(xì)胞一次,，即用 PBS 將細(xì)胞團(tuán)重懸，4℃,、500-1000 g,、10 min，收集細(xì)胞,，棄上清,。
3.用預(yù)冷的IP Lysis/Wash Buffer重懸細(xì)胞。每50mg 細(xì)胞使用500μL IP Lysis/Wash Buffer,。同時(shí)加入PMSF等相應(yīng)的抑制劑,，混勻后置于冰上靜置5-20 min（期間混勻幾次）。
4.4 ℃, 12000 -16000 g,10 min離心收集上清液,，置于冰上以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)（或置于-80 ℃長期保存）,。
血清樣品
一般建議建議用IP Lysis/Wash Buffer稀釋血清樣品至目標(biāo)蛋白終濃度為50~150 µg/mL，置于冰上備用（或置于-20 ℃長期保存）,。
免疫復(fù)合物的制備
【注】：樣品所需的量和孵育時(shí)間均依賴于每個(gè)特定的抗體-抗原體系,，因而可能需要優(yōu)化才能得到最大產(chǎn)量。
以下實(shí)驗(yàn)方案針對(duì)2-10μg 親和純化的抗體,，根據(jù)需要可以按比例放大,。
1.在離心管中，將每個(gè)樣品的細(xì)胞裂解液與2-10μg 免疫沉淀抗體結(jié)合。每個(gè)免疫沉淀反應(yīng)推薦的總蛋白量為500-1500μg,。
2.用IP Lysis/Wash Buffer將抗體以及制備好的樣品稀釋至300-500μL,。
3.在室溫下孵育1-2 h，或4 ℃過夜,，以形成免疫復(fù)合物,。
免疫沉淀
【注】：為保證微球均勻分布，使用前通過反復(fù)顛倒或輕微渦旋混勻瓶中微球,。
1.將25µLProtein G瓊脂糖加入1.5 mL 離心管中。
2.向離心管中加入500 µL 預(yù)冷PBS,，輕柔混勻,。
3.然后4℃、1000g離心5min,去除上清,。
4.向離心管中加入200-500 µL IP Lysis/Wash Buffer,。顛倒離心管數(shù)次或輕微渦旋混勻1min。4℃,、1000g離心5min,去除上清,。
5.將抗原樣品/抗體混合物加入裝有Protein G瓊脂糖的離心管中，保持混勻室溫下孵育1-2 h,，或4℃過夜,。
6.4℃、1000g離心5min,，除去未結(jié)合的樣品,，保存以備分析。
7.向離心管中加入500 µL IP Lysis/Wash Buffer,，輕柔混勻,。4℃、1000g離心5min收集瓊脂糖,，棄上清,。再重復(fù)洗兩次。
8.向離心管中加入80-100 µL SDS-PAGE Sample Loading Buffer（1×）,，將樣品置于100℃水浴或者金屬浴中加熱10 min,。離心后，保留含有目的抗原的上清,。
注意事項(xiàng)
1.本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用,，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域,。
2.請(qǐng)勿高速離心,、干燥或冷凍磁珠，這些操作會(huì)導(dǎo)致微球聚集而降低結(jié)合能力。
3.IP實(shí)驗(yàn)中不同類型的抗體與抗原結(jié)合的親和性是有區(qū)別的,，抗體與抗原結(jié)合還會(huì)受到IP Lysis/Wash Buffer的影響,，因此，如使用本實(shí)驗(yàn)步驟不能獲得最佳的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,，可自行優(yōu)化操作細(xì)節(jié)或者篩選及配制緩沖液進(jìn)行實(shí)驗(yàn),，推薦使用李記生物的相關(guān)產(chǎn)品，參照相關(guān)產(chǎn)品推薦,。
4.瓊脂糖使用前應(yīng)充分振蕩均勻,。瓊脂糖應(yīng)保存在儲(chǔ)存溶液中，防止干燥,。
附錄：蛋白G與不同種類的Ig,，s及其亞類的結(jié)合強(qiáng)度
Species | Antibody Subtype | Protein A | Species | Antibody Subtype | Protein A | Species | Antibody Subtype | Protein A |
Human | Total IgG | +++++ | Mouse | Total IgG | +++ | Cow | Total IgG | +++++ |
IgG1, IgG2 | +++++ | IgM | – | IgG1,IgG2 | +++++ | |||
IgG3 | +++++ | IgG1 | +++++ | Goat | Total IgG | +++++ | ||
IgG4 | +++++ | IgG2a ,IgG2b | +++ | IgG1,IgG2 | +++++ | |||
IgM | – | IgG3 | +++ | Sheep | Total IgG | +++ | ||
IgD | – | Rat | Total IgG | +++ | IgG1, IgG2 | +++ | ||
IgA | – | IgG1 | +++ | Horse | Total IgG | +++ | ||
IgA1, IgA2 | + | IgG2a | ++++++ | IgG(ab),IgG(c) | + | |||
IgE | +++ | IgG2b | +++ | IgG(T) | +++++ | |||
Fab | +++ | IgG2c | +++++ | Monkey | Total IgG | +++++ | ||
ScFv | + | Pig | Total IgG | +++ | Chicken | Total IgG | – | |
Rabbit | Total IgG | +++++ | Donkey | Total IgG | +++++ | Notes: | + weak binding | +++ medium binding |
Guinea Pig | Total IgG | +++ | Cat | Total IgG | +++ | +++++ strong binding | – no binding | |
Hamster | Total IgG | +++ | Dog | Total IgG | +++ |
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