日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

Protein A/G瓊脂糖凝膠通常用于從血清、細(xì)胞培養(yǎng)上清或腹水中分離抗體,，以及從細(xì)胞或組織提取物中分離抗原進(jìn)行免疫沉淀和免疫共沉淀,。蛋白A/G瓊脂糖偶聯(lián)高質(zhì)量的重組蛋白A/G，它可以結(jié)合抗體的IgG結(jié)合域,這些結(jié)構(gòu)域可以與許多不同物種的抗體結(jié)合,，包括小鼠,、人、兔,、豬,、狗和貓。

訂購信息

常溫運(yùn)輸,。4℃保存,，有效期24個(gè)月。

技術(shù)參數(shù)

懸浮細(xì)胞樣品

1.4℃,、500-1000 g、10 min,，收集細(xì)胞,，棄上清。

2.用PBS 洗細(xì)胞一次,，即用 PBS 將細(xì)胞團(tuán)重懸,，4℃、500-1000 g,、10 min,，收集細(xì)胞，棄上清,。

3.用預(yù)冷的IP Lysis/Wash Buffer重懸細(xì)胞,。每50mg 細(xì)胞使用500μL IP Lysis/Wash Buffer,。同時(shí)加入PMSF等相應(yīng)的抑制劑，混勻后置于冰上靜置5-20 min（期間混勻幾次）,。

4.4 ℃, 12000 -16000 g,10 min離心收集上清液,，置于冰上以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)（或置于-80 ℃長期保存）。

血清樣品

一般建議建議用IP Lysis/Wash Buffer稀釋血清樣品至目標(biāo)蛋白終濃度為50~150 µg/mL,，置于冰上備用（或置于-20 ℃長期保存）,。

免疫復(fù)合物的制備

【注】：樣品所需的量和孵育時(shí)間均依賴于每個(gè)特定的抗體-抗原體系，因而可能需要優(yōu)化才能得到最大產(chǎn)量,。

以下實(shí)驗(yàn)方案針對2-10μg 親和純化的抗體,，根據(jù)需要可以按比例放大。

1.在離心管中,，將每個(gè)樣品的細(xì)胞裂解液與2-10μg 免疫沉淀抗體結(jié)合,。每個(gè)免疫沉淀反應(yīng)推薦的總蛋白量為500-1500μg。

2.用IP Lysis/Wash Buffer將抗體以及制備好的樣品稀釋至300-500μL,。

3.在室溫下孵育1-2 h,，或4 ℃過夜，以形成免疫復(fù)合物,。

免疫沉淀

【注】：為保證微球均勻分布,，使用前通過反復(fù)顛倒或輕微渦旋混勻瓶中微球。

1.將25µLProtein A/G瓊脂糖加入1.5 mL 離心管中,。

2.向離心管中加入500 µL 預(yù)冷PBS,，輕柔混勻。

3.然后4℃,、1000g離心5min,去除上清,。

4.向離心管中加入200-500 µL IP Lysis/Wash Buffer,。顛倒離心管數(shù)次或輕微渦旋混勻1min,。4℃、1000g離心5min,去除上清,。

5.將抗原樣品/抗體混合物加入裝有Protein A/G瓊脂糖的離心管中,，保持混勻室溫下孵育1-2 h，或4℃過夜,。

6.4℃,、1000g離心5min，除去未結(jié)合的樣品,，保存以備分析,。

7.向離心管中加入500 µL IP Lysis/Wash Buffer，輕柔混勻,。4℃,、1000g離心5min收集瓊脂糖,，棄上清。再重復(fù)洗兩次,。

8.向離心管中加入80-100 µL SDS-PAGE Sample Loading Buffer（1×）,，將樣品置于100℃水浴或者金屬浴中加熱10 min。離心后,，保留含有目的抗原的上清,。

注意事項(xiàng)

1.本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用，不得用于臨床診斷,、治療等領(lǐng)域,。

2.請勿高速離心、干燥或冷凍磁珠,，這些操作會導(dǎo)致微球聚集而降低結(jié)合能力,。

3.IP實(shí)驗(yàn)中不同類型的抗體與抗原結(jié)合的親和性是有區(qū)別的，抗體與抗原結(jié)合還會受到IP Lysis/Wash Buffer的影響,，因此,，如使用本實(shí)驗(yàn)步驟不能獲得最佳的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可自行優(yōu)化操作細(xì)節(jié)或者篩選及配制緩沖液進(jìn)行實(shí)驗(yàn),，推薦使用李記生物的相關(guān)產(chǎn)品,，參照相關(guān)產(chǎn)品推薦。

4.瓊脂糖使用前應(yīng)充分振蕩均勻,。瓊脂糖應(yīng)保存在儲存溶液中,，防止干燥。

附錄：蛋白A/G與不同種類的Ig,，s及其亞類的結(jié)合強(qiáng)度

相關(guān)產(chǎn)品推薦

1XPBS （無菌）                    （貨號：AC08L011）

Western/IP細(xì)胞裂解液（帶抑制劑） （貨號：AP01L076）

蛋白示蹤上樣緩沖液（5 x）         （貨號： AP14L036）