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貨物所在地：上海上海市
更新時間：2024-10-30 21:00:07
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Anti-Flag瓊脂糖凝膠Anti-Flag Affinity Gel可以實現(xiàn)高效快速的抗原分離,。免疫沉淀試劑盒配有經(jīng)過優(yōu)化預(yù)制的緩沖液，為免疫沉淀實驗提供了最佳的反應(yīng)條件,，增強了免疫沉淀實驗的穩(wěn)定性,。本產(chǎn)品可廣泛應(yīng)用于細胞裂解物、細胞分泌上清,、血清,、腹水等樣品中抗原的免疫沉淀反應(yīng),。
訂購信息
產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 | 價格 |
Anti-Flag瓊脂糖凝膠 | AP64L243 | 1 mL | 1700 |
運輸與保存
常溫運輸。4℃保存,，有效期24個月,。
技術(shù)參數(shù)
Composition | mouse IgG monoclonal Ab |
Matrix | 4% cross-linked agarose |
Particle size | 90 um |
Concentration | 50% settled resin in TBS with 0.02% sodium azide |
Binding Capacity | ≥ 1 mg Flag-tagged fusion protein/mL of settled resin |
Application | rProtein Purification,，IP |
使用方法
貼壁細胞樣品
1.移去培養(yǎng)基,，用PBS洗細胞兩次。
2.收集細胞至1.5 mLEP 管內(nèi),，按比例加入IP Lysis/Wash Buffer,，同時加入PMSF等相應(yīng)的抑制劑，混勻后置于冰上靜置5-20 min（期間混勻幾次）,。
3.4 ℃, 12000-16000 g,10 min離心收集上清液,，置于冰上以備后續(xù)實驗（或置于-80 ℃長期保存）。
培養(yǎng)皿IP Lysis/Wash Buffer推薦使用體積：
培養(yǎng)皿大小/表面積 | IP Lysis/Wash Buffer體積 |
100 mm x 100 mm | 500-1000 µL |
100 mm x 60 mm | 100-300 µL |
6孔板 | 100-200 µL |
懸浮細胞樣品
1.4℃,、500-1000 g,、10 min，收集細胞,，棄上清,。
2.用PBS 洗細胞一次，即用PBS 將細胞團重懸,，4℃,、500-1000 g、10 min,，收集細胞,，棄上清。
3.用預(yù)冷的IP Lysis/Wash Buffer重懸細胞,。每50 mg 細胞使用500μL IP Lysis/Wash Buffer,。同時加入PMSF等相應(yīng)的抑制劑，混勻后置于冰上靜置5-20 min（期間混勻幾次）,。
4.4 ℃, 12000 -16000 g,10 min離心收集上清液,，置于冰上以備后續(xù)實驗（或置于-80 ℃長期保存）。
血清樣品
一般建議建議用IP Lysis/Wash Buffer稀釋血清樣品至目標蛋白終濃度為50~150 µg/mL,，置于冰上備用（或置于-20 ℃長期保存）,。
免疫沉淀
【注】：為保證凝膠均勻分布，使用前通過反復顛倒或輕微渦旋混勻瓶中凝膠,。
1.將25 µL的Anti-Flag Affinity Gel加入1.5 mL 離心管中,。
2.向凝膠中加入500 µL 預(yù)冷PBS，輕柔混勻,。
3.將離心管放入離心機中1000rpm,，5min收集凝膠到離心管的底部,，去除上清。
4.向離心管中加入200-500 µL IP Lysis/Wash Buffer,。顛倒離心管數(shù)次或輕微渦旋混勻1 min,。將離心管放入離心機中1000rpm，5min收集凝膠到離心管的底部,，去除上清,。
5.將制備好含有Flag標記蛋白的樣品加入裝有凝膠的離心管中，保持混勻室溫下孵育2-4 h,。
6.離心1000rpm,，5min收集凝膠，除去未結(jié)合的樣品,，保存以備分析,。
7.向離心管中加入500 µL IP Lysis/Wash Buffer，輕柔混勻,。收集凝膠,，棄上清。再重復洗兩次,。
8.變性洗脫：向離心管中加入80-100 µL SDS-PAGE Sample Loading Buffer（1×）,，將樣品置于100℃水浴或者金屬浴中加熱10 min。通過磁力架分離磁珠,，保留含有目的抗原的上清,。
【注】：如需保持蛋白活性，也可采用以下洗脫方式,。
低pH洗脫：向離心管中加入100 µL Elution Buffer,。保持混勻在室溫下孵育離心管5-10 min。通過離心分離凝膠,，保留含有目的抗原的上清,。每100 µL洗出液中加入20 µL Neutralization Buffer來中和低pH。
注意事項
1.本產(chǎn)品僅限于科學實驗研究使用,，不得用于臨床診斷,、治療等領(lǐng)域。
2.請勿高速離心,、干燥或冷凍凝膠,，這些操作會導致凝膠聚集而降低結(jié)合能力。
3.IP實驗中不同類型的抗體與抗原結(jié)合的親和性是有區(qū)別的,，抗體與抗原結(jié)合還會受到IP Lysis/Wash Buffer的影響,，因此，如使用本實驗步驟不能獲得最佳的實驗結(jié)果,，可自行優(yōu)化操作細節(jié)或者篩選及配制緩沖液進行實驗,，推薦使用李記生物的相關(guān)產(chǎn)品,，參照相關(guān)產(chǎn)品推薦。
4.微球使用前應(yīng)充分振蕩均勻,。微球應(yīng)保存在儲存溶液中,，防止干燥。
相關(guān)產(chǎn)品推薦
1XPBS （無菌） （貨號：AC08L011）
Western/IP細胞裂解液（帶抑制劑） （貨號：AP01L076）
蛋白示蹤上樣緩沖液（5 x） （貨號：AP14L036）
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