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iFluor 790琥珀酰亞胺酯（Cy7升級產(chǎn)品）是一系列很棒的熒光標(biāo)記染料,，可以覆蓋整個可見光譜。所有iFluor 染料都具有優(yōu)異的水溶性,。它們的親水性使有機溶劑的使用極小化,。iFluor 染料也具有比經(jīng)典熒光標(biāo)記染料更好的標(biāo)記性能，如FITC,，TRITC,，Texas Red ，Cy3 ,，Cy5和Cy7,。一些iFluor 染料在某些抗體上明顯優(yōu)于Alexa Fluor 標(biāo)記染料。

iFluor 790琥珀酰亞胺酯（Cy7升級產(chǎn)品）

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產(chǎn)品名稱	貨號	規(guī)格
iFluor 790琥珀酰亞胺酯（Cy7升級產(chǎn)品）	AP35L144	1mg

產(chǎn)品描述

iFluor 染料是一系列很棒的熒光標(biāo)記染料,，可以覆蓋整個可見光譜,。所有iFluor 染料都具有優(yōu)異的水溶性。它們的親水性使有機溶劑的使用極小化,。iFluor 染料也具有比經(jīng)典熒光標(biāo)記染料更好的標(biāo)記性能,，如FITC，TRITC,，Texas Red ,，Cy3 ，Cy5和Cy7,。一些iFluor 染料在某些抗體上明顯優(yōu)于Alexa Fluor 標(biāo)記染料,。它們是用于標(biāo)記蛋白質(zhì)和核酸而不包含性能的極便宜的熒光染料（替代Alexa Fluor 染料）。每種iFluor染料的開發(fā)都與特定的Alexa Fluor 或其他標(biāo)記染料（如DyLight 染料）的光譜特性相匹配,。
琥珀酰亞胺基（NHS）酯被證明是用于胺修飾的很棒的試劑,，因為形成的酰胺鍵基本上與天然肽鍵相同并且穩(wěn)定,。這些試劑通常是穩(wěn)定的并且與脂族胺顯示出良好的反應(yīng)性和選擇性,。當(dāng)琥珀酰亞胺酯化合物用于綴合反應(yīng)時，需要考慮的因素很少：1溶劑：在大多數(shù)情況下,，活性染料應(yīng)溶于無水二甲基甲酰胺（DMF）或二甲基亞砜（DMSO）中,。2：反應(yīng)pH：胺與琥珀酰亞胺酯的標(biāo)記反應(yīng)強烈依賴于pH。胺反應(yīng)性試劑與非質(zhì)子化脂族胺基團反應(yīng),，包括蛋白質(zhì)的末端胺和賴氨酸的β-氨基,。因此,，胺酰化反應(yīng)通常在pH 7.5以上進行,。通過琥珀酰亞胺酯進行的蛋白質(zhì)修飾通?？梢栽?/span>pH 8.5-9.5下進行。3：反應(yīng)緩沖液：使用胺反應(yīng)試劑時,，必須避免使用含有游離胺（如Tris和甘氨酸）和硫醇化合物的緩沖液,。廣泛用于蛋白質(zhì)沉淀的銨鹽（例如硫酸銨和乙酸銨）也必須在進行染料綴合之前除去（例如通過透析）。4：反應(yīng)溫度：大多數(shù)綴合在室溫下進行,。然而,，特定標(biāo)記反應(yīng)可能需要升高或降低的溫度。
技術(shù)資料

1.Ex(nm)：786
2.Em(nm)：811
3.分子量：1768.30
4.溶劑：DMSO
保存方法
-20℃避光長期保存,，保質(zhì)期12個月,。
使用方法
1.準(zhǔn)備蛋白質(zhì)儲備溶液（溶液A）：
將100μL反應(yīng)緩沖液（如1 M碳酸鈉溶液或1 M磷酸鹽緩沖液，pH~9.0）與900μL目標(biāo)蛋白溶液（如抗體,，蛋白質(zhì)濃度> 2 mg / ml,，如果可能）混合至100μL給予1 mL蛋白質(zhì)標(biāo)記原液。
【注】：
1：蛋白質(zhì)溶液（溶液A）的pH值應(yīng)為8.5±0.5,。如果蛋白質(zhì)溶液的pH低于8.0,，則使用1M碳酸氫鈉溶液或1M pH 9.0磷酸鹽緩沖液將pH調(diào)節(jié)至8.0~9.0的范圍。
2：蛋白質(zhì)應(yīng)溶解于pH7.2~7.4的1X磷酸鹽緩沖鹽水（PBS）中,。如果蛋白質(zhì)溶解在Tris或甘氨酸緩沖液中,，則必須用pH7.2~7.4的1X PBS透析，以除去廣泛用于蛋白質(zhì)沉淀的游離胺或銨鹽（例如硫酸銨和乙酸銨）,。
3：用牛血清白蛋白（BSA）或明膠穩(wěn)定的不純抗體或抗體不能很好地標(biāo)記,。 die dan hua na 或硫柳汞的存在也可能干擾綴合反應(yīng)?？梢酝ㄟ^透析或旋轉(zhuǎn)柱除去 die dan hua na 或硫柳汞,，以獲得很棒的標(biāo)記結(jié)果。
4：如果蛋白質(zhì)濃度低于2 mg / mL,，則結(jié)合效率會顯著降低,。為獲得很棒的標(biāo)記效率，建議極終蛋白質(zhì)濃度范圍為2~10 mg / mL,。
2.準(zhǔn)備染料儲備溶液（溶液B）：
將無水DMSO加入到iFluor 染料SE小瓶中以制備10~20mM儲備溶液,。通過移液或渦旋混合均勻。
【注】：
在開始綴合前準(zhǔn)備染料儲備溶液（溶液B）,。及時使用,。染料儲備溶液的長期儲存可降低染料活性。溶液B可在冰箱中保存兩周，避光保存,。避免凍融循環(huán),。
3.確定合適的染料/蛋白質(zhì)比例（可選）：
【注】：
每種蛋白質(zhì)都需要不同的染料/蛋白質(zhì)比例，這也取決于染料的性質(zhì),。蛋白質(zhì)的過度標(biāo)記可能不利地影響其結(jié)合親和力,，而低染料/蛋白質(zhì)比率的蛋白質(zhì)綴合物會降低靈敏度。我們建議您通過使用連續(xù)不同量的標(biāo)記染料溶液重復(fù)步驟4和5來實驗確定合適的染料/蛋白質(zhì)比率,。通常,，對于大多數(shù)染料 - 蛋白質(zhì)綴合物，推薦使用4-6種染料/蛋白質(zhì),。
3.1使用10：1摩爾比的溶液B（染料）/溶液A（蛋白質(zhì)）作為起始點：將5 μL染料儲備溶液（溶液B,，假設(shè)染料儲備溶液為10 mM）加入到樣品瓶中。蛋白質(zhì)溶液（95μl溶液A）有效搖動,。假設(shè)蛋白質(zhì)濃度為10 mg / mL并且蛋白質(zhì)的分子量為200KD,，蛋白質(zhì)的濃度為0.05mM。
【注】：
蛋白質(zhì)溶液中DMSO的濃度應(yīng)<10％,。
3.2運行綴合反應(yīng)（參見下面的步驟4）,。
3.3重復(fù)＃3.2，溶液B /溶液A的摩爾比為5：1;分別為15：1和20：1,。
3.4使用預(yù)制的旋轉(zhuǎn)柱純化所需的綴合物,。
3.5計算上述4種結(jié)合物的染料/蛋白質(zhì)比（DOS）（見說明書）。
3.6運行上述4種結(jié)合物的功能測試,，確定合適的染料/蛋白質(zhì)比例,，以擴大標(biāo)記反應(yīng)。
4.運行綴合反應(yīng)：
4.1有效加入適量的染料儲備溶液（溶液B）到蛋白質(zhì)溶液（溶液A）的小瓶中晃動,。
【注】：
溶液B /溶液的合適摩爾比由步驟3.6確定,。如果跳過步驟3，我們建議使用10：1溶液B（染料）/溶液A（蛋白質(zhì)）的摩爾比,。
4.2繼續(xù)在室溫下旋轉(zhuǎn)或搖動反應(yīng)混合物30~60 min,。
5.純化綴合物
以下方案是使用Sephadex G-25柱純化染料 - 蛋白質(zhì)綴合物的實例。
5.1按照制造說明準(zhǔn)備Sephadex G-25色譜柱,。
5.2將反應(yīng)混合物（直接從步驟4）加載到Sephadex G-25柱的頂部,。
5.3樣品在頂部樹脂表面下方運行時立即加入PBS（pH 7.2~7.4）。
5.4向所需樣品中加入更多PBS（pH 7.2~7.4）以完成色譜柱純化,。合并含有所需染料—蛋白質(zhì)綴合物的級分,。
【注】：
1：立即使用時，染料 - 蛋白質(zhì)偶聯(lián)物需要用染色緩沖液稀釋,，并等分多次使用,。
2：對于長期儲存,，染料 - 蛋白質(zhì)綴合物溶液需要濃縮或冷凍干燥
光譜性質(zhì)

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