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Quick Cell支原體快速檢測(cè)試劑盒(細(xì)胞培養(yǎng))

產(chǎn)品描述
　　Quick Cell支原體快速檢測(cè)試劑盒(細(xì)胞培養(yǎng))是專(zhuān)門(mén)用于快速檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清或別的液體樣品(如血清)中是否存在支原體污染的試劑,。本試劑盒操作簡(jiǎn)單，反應(yīng)時(shí)間短,，只需吸取1 μl細(xì)胞培養(yǎng)上清加入反應(yīng)體系中,，60℃孵育1h，肉眼觀察即可判定結(jié)果,，與傳統(tǒng)檢測(cè)支原體的PCR法優(yōu)勢(shì)明顯,。本試劑盒檢測(cè)范圍廣，可以檢測(cè)：(1)M.Hyorhinis,、(2)M.Fermentans,、(3)M.Arginini、(4)M. hominis、(5)M. orale,、(6)M. salivarium,、(7)M.pirum、(8)Acholeplasma Laidlawii,、(9)M. agalactiae,、(10)M.bovis、(11)M. buccale,、(12)M. arthritidis,、(13)M. pulmonis等幾乎所有常見(jiàn)的污染細(xì)胞的支原體(注：M.為Mycoplasma的縮寫(xiě))。以上13種支原體約占細(xì)胞支原體污染的99%以上,。絕大多數(shù)支原體污染集中于前8種,。因此非常適合于與細(xì)胞生物學(xué)相關(guān)的科研實(shí)驗(yàn)室及企業(yè)的日常支原體檢測(cè)。
訂購(gòu)信息

保存方法
　　冰袋運(yùn)輸，-20℃保存,，保質(zhì)期3年,。
實(shí)驗(yàn)操作流程
1.待測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清收集
對(duì)于貼壁細(xì)胞，待測(cè)的樣品建議來(lái)源于至少培養(yǎng)三天以上且匯合度在70-90%左右的細(xì)胞培養(yǎng)上清,，中途不再換液,，此時(shí)上清中支原體含量較高，便于檢出,，無(wú)需離心,，直接吸取上清,。對(duì)于懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞,，也需要在換液或者傳代后讓細(xì)胞生長(zhǎng)3天以上，再取培養(yǎng)液進(jìn)行檢測(cè),，也無(wú)需離心,，哺乳動(dòng)物細(xì)胞的存在不會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果。
【注】：收集的待測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液樣品如果不立即檢測(cè),，請(qǐng)放于-20℃或-80℃冰箱保存,。樣品在-20℃至少可以保存一個(gè)月，在-80℃可以長(zhǎng)期保存,。
2.反應(yīng)體系的配制
將溶液Ⅰ,、Ⅲ從-20℃冰箱中取出，室溫放置待其融化,，液態(tài)溶液Ⅱ需一直置于冰上備用,。溶液Ⅰ,、Ⅱ、Ⅲ使用前各需1000 rpm離心30 s,，用移液槍吹洗均勻,。三種試劑按表1比例混合，吹打均勻后,，按每管24 μL 的量分裝到0.2 mL透明度良好的薄壁PCR管中,。接著，往陽(yáng)性對(duì)照管(Positive)中加入1 μL 陽(yáng)性支原體DNA,，往陰性對(duì)照管(Negative)中加入1 μL 無(wú)菌水,，往測(cè)試管(Test)中加入1 μL 待測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液，反應(yīng)液的總體積為25 μL,。
【注】：裝有陽(yáng)性支原體DNA的螺口管開(kāi)蓋之前,，用迷你離心機(jī)離心下；進(jìn)行反應(yīng)體系配制的房間,，與進(jìn)行樣品前處理,、加陽(yáng)性對(duì)照DNA、樣品DNA的房間建議分開(kāi),。
表1：恒溫反應(yīng)體系的配制

【注】：每次實(shí)驗(yàn)加上一個(gè)陰性對(duì)照,、一個(gè)陽(yáng)性對(duì)照，便于結(jié)果的判斷和分析,。如有多個(gè)樣品,，為了避免移液時(shí)損失，分裝時(shí)建議溶液Ⅰ,、Ⅱ,、Ⅲ用量乘以系數(shù)1.08，保證每個(gè)反應(yīng)管中的反應(yīng)液足量,。
3. 反應(yīng)
PCR儀設(shè)置程序：61℃,，60 min，熱蓋溫度,，100 ℃,。
【注】：若實(shí)驗(yàn)室所沒(méi)有PCR儀，反應(yīng)也可以在水浴鍋中進(jìn)行,，需要在每管中加入25 μL礦物油,，以防止液體蒸發(fā)導(dǎo)致結(jié)果不準(zhǔn)確。水浴鍋顯示溫度與實(shí)際溫度的溫差建議不超過(guò)0.5℃,，放入已經(jīng)升溫到61℃的水浴內(nèi),，準(zhǔn)確反應(yīng)60 min。
4. 結(jié)果判斷
61℃反應(yīng)60 min后，立刻取出反應(yīng)管,，放于室溫,。以一張白紙或白色泡沫盒為背景，通過(guò)反應(yīng)管溶液顏色的變化,，即可判斷檢測(cè)結(jié)果,。如果溶液為藍(lán)綠色，則說(shuō)明有支原體污染,；如果為紫紅色,，則說(shuō)明沒(méi)有支原體污染(如圖1)。顏色反應(yīng)如下圖所示,，也可以以陰性對(duì)照與陽(yáng)性對(duì)照作為參考,。
【注】：在61℃反應(yīng)的時(shí)間必須準(zhǔn)確計(jì)時(shí)，多不得超過(guò)5 min,，以免出現(xiàn)假陽(yáng)性,。反應(yīng)產(chǎn)物不可開(kāi)蓋，防止產(chǎn)生氣溶膠會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性的出現(xiàn),，必須在反應(yīng)后2 h 內(nèi)進(jìn)行結(jié)果判斷,，避免室溫下擴(kuò)增反應(yīng)進(jìn)行，影響結(jié)果判別,。在少數(shù)情況下(如支原體含量較低),，溶液顏色可能會(huì)介于紫色和天藍(lán)色之間，此時(shí)可將反應(yīng)時(shí)間繼續(xù)延長(zhǎng)到80 min,，如果顏色變?yōu)樗{(lán)色,，則判定為陽(yáng)性，否則為陰性,。

               

產(chǎn)品圖片

注意事項(xiàng)
1．必須確保使用的移液槍本身沒(méi)有殘留的支原體,，盡量用新購(gòu)移液器、新開(kāi)封的槍頭操作,。整個(gè)操作過(guò)程,，佩戴口罩，不要開(kāi)口說(shuō)話,。由于本試劑盒非常靈敏,，移液槍如吸附有,，或者人為帶入支原體均有可能造成假陽(yáng)性,。
2．建議使用帶濾芯的吸頭吸取溶液和陽(yáng)性支原體等。如果沒(méi)有帶濾芯的吸頭,，至少應(yīng)該使用新開(kāi)封的吸頭,。
3．檢測(cè)過(guò)程中，用過(guò)的各類(lèi)吸頭、離心管務(wù)必小心處理,，應(yīng)裝入含有半瓶水的帶蓋的,、可密封的垃圾瓶?jī)?nèi)。反應(yīng)后的PCR管,，不要開(kāi)蓋,，用過(guò)后將其用自封袋密閉，扔到遠(yuǎn)離細(xì)胞房的獨(dú)立垃圾桶內(nèi),。
4．如果細(xì)胞被支原體污染,，可以選購(gòu)本公司或其他供應(yīng)商提供的去除試劑盡早去除。
表2：Quick Cell 支原體快速檢測(cè)試劑盒(細(xì)胞培養(yǎng))的優(yōu)勢(shì)

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