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產品描述
SDS細胞裂解液（帶抑制劑）是一種比較強烈的細胞組織裂解液，通過陰離子去垢劑SDS促進細胞膜的崩解,，特別適用于膜蛋白或者細胞骨架蛋白等難溶蛋白的溶解,，有利于膜蛋白，胞漿蛋白,、核蛋白,、胞漿磷酸化蛋白及細胞核轉錄因子的提取。本產品具有有強烈的蛋白變性作用，不能用于非變性蛋白方面的研究,。本產品裂解得到的蛋白樣品可用于常規(guī)的Western,、染色質免疫共沉淀 (chromatin immunoprecipitation，ChIP)等,。
訂購信息
產品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 | 價格 |
SDS細胞裂解液(帶抑制劑） | AP01L065 | 100 mL | 218 |
產品組分
| 產品編號 | 產品組成 | 包裝規(guī)格 |
| AP01L065 | SDS細胞裂解液 | 100 mL |
| 磷酸酶抑制劑 | 2*1 mL | |
| PMSF | 1 mL | |
| 產品說明書 | 一份 |
保存方法
裂解液4℃保存,，其余-20℃保存，保質期一年,。
使用方法
1. 對于培養(yǎng)細胞樣品
對于貼壁細胞：去除培養(yǎng)液,，用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾,，可以不洗),。按照6孔板每孔加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下,，使裂解液和細胞充分接觸,。通常裂解液接觸細胞1~2秒后，細胞就會被裂解,。如果用于ChIP,，初步裂解后需在冰浴上繼續(xù)裂解10 min。
對于懸浮細胞：離心收集細胞,，用手指把細胞用力彈散,。按照6孔板每孔細胞加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞,。如果細胞量較多,，必需分裝成50~100萬細胞/管，然后再裂解,。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀,。如果用于ChIP，初步裂解后需在冰浴上繼續(xù)裂解10分鐘,。具體SDS細胞裂解液的使用量參照表1.
(3) 充分裂解后,，10000~14000rpm離心3~5 min，取上清,，即可進行后續(xù)的PAGE,、Western和ChIP等操作。
2. 對于組織樣品：
(1) 把組織剪切成細小的碎片。
(2) 融解SDS細胞裂解液,，混勻,。取適當量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內加入PMSF,，使PMSF的終濃度為1mM,。
(3) 按照每20毫克組織加入150—250μL裂解液的比例加入裂解液，如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液,，如果需要高濃度的蛋白樣品,，可以適當減少裂解液的用量。具體SDS細胞裂解液的用量參照表1,。
(4) 用玻璃勻漿器勻漿,，直至充分裂解。如果用于ChIP,，初步裂解后需在冰浴上繼續(xù)裂解10分鐘,。
(5) 充分裂解后，10000~14000 rpm離心3~5 min,，取上清,，即可進行后續(xù)的PAGE、Western和ChIP等操作,。
注意事項
表1 :SDS細胞裂解液的使用量
| 樣品種類 | 樣品來源 | 收獲細胞數(shù) | RIPA用量 | 可制備樣品數(shù) |
| 細胞 | 6孔板 | 2.5*106 | 150-250 μL | 400-600 |
| 60 mm培養(yǎng)板 | 5.2*106 | 300-500 μL | 200-300 | |
| 90 mm培養(yǎng)板 | 12.2*106 | 500-1000 μL | 100-200 | |
| 25 cm2培養(yǎng)瓶 | 5*106 | 300-500 μL | 200-300 | |
| 75 cm2培養(yǎng)瓶 | 2*107 | 1000-2000 μL | 50-100 | |
| 組織 | 20 mg組織塊 | 150-250 μL | 400-600 |
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