日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

產(chǎn)品描述

Annexin V-647/PI 細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒提供了一種快速簡(jiǎn)便的方法,，通過(guò)標(biāo)記早期凋亡細(xì)胞（遠(yuǎn)紅）和壞死細(xì)胞（紅色），用于檢測(cè)細(xì)胞凋亡水平,。產(chǎn)品可以使用流式細(xì)胞儀或其它熒光檢測(cè)設(shè)備進(jìn)行檢測(cè),。

Annexin V-647可以標(biāo)記凋亡細(xì)胞。Annexin V選擇性結(jié)合磷酯酰絲氨酸(phosphatidylserine,，簡(jiǎn)稱 PS),。在細(xì)胞發(fā)生早期凋亡時(shí)，PS 會(huì)外翻到細(xì)胞表面,，即細(xì)胞膜外側(cè),。用遠(yuǎn)紅色熒光探針647 標(biāo)記的 Annexin V，即 Annexin V-647,，可以結(jié)合外翻的磷酯酰絲氨酸,，從而檢測(cè)細(xì)胞凋亡的重要特征。我們公司的647染料與普通熒光素相比,，熒光亮度更高,，且不受環(huán)境中 pH 的影響，具有良好的光穩(wěn)定性,。

碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一種 DNA 結(jié)合染料，它可以染色壞死細(xì)胞或凋亡晚期喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞的細(xì)胞核,。PI 可以由 488,532 或 546 nm 的激光激發(fā),，呈現(xiàn)紅色熒光。

訂購(gòu)信息

保存方法

冰袋運(yùn)輸,，4℃避光保存,，保質(zhì)期12個(gè)月,。

使用方法

   下列實(shí)驗(yàn)方案以利用星形孢菌素誘導(dǎo)Jurkat細(xì)胞凋亡為例，如果使用其他誘導(dǎo)劑和其他類型的細(xì)胞,，實(shí)驗(yàn)條件需要略作調(diào)整,。

1.流式細(xì)胞檢測(cè)

（1）根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。檢測(cè)樣品中應(yīng)包含未經(jīng)處理的細(xì)胞樣品,，作為陰性對(duì)照,。此外，設(shè)定一組樣品做單染,，用于調(diào)節(jié)補(bǔ)償,。

（2）收集細(xì)胞。懸浮細(xì)胞：300 g,，4℃離心5 min收集細(xì)胞,；貼壁細(xì)胞：用不含EDTA的胰酶消化后300 g，4℃離心5 min收集細(xì)胞,，胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng),，以防引起假陽(yáng)性。

注：用胰蛋白酶消化然后使細(xì)胞在合適的細(xì)胞培養(yǎng)條件和培養(yǎng)基中恢復(fù)約30分鐘,，然后再染色,。胰蛋白酶消化會(huì)暫時(shí)破壞質(zhì)膜，允許Annexin V結(jié)合磷脂酰絲氨酸在細(xì)胞膜的細(xì)胞質(zhì)表面上,，從而導(dǎo)致假陽(yáng)性染色,。

（3）用預(yù)冷的PBS洗滌細(xì)胞兩次，每次均在300 g,，4℃下離心5 min,，收集1-5×105個(gè)細(xì)胞并用100μL 1×結(jié)合緩沖液重懸細(xì)胞。

（4）每管加入 4-5μL的Annexin V-647和5μL的PI工作液,。

注：我們推薦準(zhǔn)備兩管額外的流式管,，每管中只加入一種單染染料（Annexin V-647和PI各一管），用于流式的補(bǔ)償調(diào)節(jié),。

（5）室溫避光孵育 10-15 min,，為避免影響細(xì)胞凋亡進(jìn)程，孵育過(guò)程可在冰上操作,。

（6）每管加入400μL的PBS或1×結(jié)合緩沖液,，盡快通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況。Annexin V-647可以由647 nm激光激發(fā),，檢測(cè)熒光發(fā)射光譜約在647 nm處（APC通道）,，PI發(fā)射光譜約在617 nm處。

2.熒光顯微鏡檢測(cè)

   對(duì)于懸浮細(xì)胞,，可參照流式細(xì)胞檢測(cè)的方法進(jìn)行具體操作,。

（1）在蓋玻片或載玻片小室中接種細(xì)胞,。

（2）根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。檢測(cè)樣品中應(yīng)包含未經(jīng)處理的細(xì)胞樣品,，作為陰性對(duì)照,。

（3）用PBS 洗滌細(xì)胞。

注：細(xì)胞收集后如果不用PBS清洗,，可以用含血清的培養(yǎng)基直接替代Annexin V結(jié)合緩沖液,，但是 Annexin V的使用濃度需要重新優(yōu)化。

（4）每 100 μL的Annexin V結(jié)合緩沖液中加入5-25μL的Annexin V-647和 5μL的PI,。

注：適宜使用濃度由具體實(shí)驗(yàn)要求確定,。

（5）向培養(yǎng)板中加入足量的染液以覆蓋全部細(xì)胞，室溫避光孵育15-30 min,。為避免影響細(xì)胞凋亡進(jìn)程,，孵育過(guò)程可在冰上操作，但孵育時(shí)間至少延長(zhǎng)至30 min,。

（6）用 1×結(jié)合緩沖液清洗細(xì)胞,。

（7）將孵育有細(xì)胞的蓋玻片置于載玻片上，載玻片可提前加一滴 1×結(jié)合緩沖液,；對(duì)于培養(yǎng)在小室內(nèi)的細(xì)胞,，可直接加入足量的 1×結(jié)合緩沖液覆蓋細(xì)胞。

（8）使用合適的濾光片在熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞,。Annexin V-647可用 APC 適用的濾光片,，PI可用 Cy3或者Texas濾光片。

注意事項(xiàng)

熒光染料均存在淬滅問(wèn)題,，保存和使用過(guò)程中請(qǐng)盡量注意避光,，以減緩熒光淬滅。