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產(chǎn)品描述

信使核糖核酸（mRNA）在細胞質(zhì)中啟動蛋白質(zhì)翻譯,，不需要進入細胞核,，可實現(xiàn)比DNA轉染更快的蛋白表達，且避免基因整合風險,。

EZ Trans mRNA轉染試劑是一種結合了陽離子聚合物和脂質(zhì)體優(yōu)點的轉染試劑,，協(xié)同促進轉染復合物進入細胞，隨后在胞質(zhì)中釋放,，能夠在多種細胞類型中實現(xiàn)高效,、低毒的轉染效果。

訂購信息

運輸與保存

藍冰運輸,。4℃保存,，有效期 6 個月；-30℃至-10℃保存,，有效期12個月,。注：避免反復凍融。

使用方法（以 24 孔板為例,，其他培養(yǎng)皿中轉染請參考表 1）

1． 接種細胞

對于貼壁細胞：轉染前一天,，將細胞按照每孔1-2x10^5個細胞的量進行鋪板，使其在轉染時密度為60%-80% 為佳,。

對于懸浮細胞：轉染當天,，配制轉染試劑-核酸復合物之前，用PBS清洗細胞1-2次,，用250 μL Opti-MEM I 減血清培養(yǎng)基 (無血清) 重懸細胞,，在24孔板中進行細胞鋪板，細胞密度為60-80%,。

2． 準備轉染試劑-mRNA復合物

(1)  對于每孔細胞,，將 0.5 μg待轉染mRNA加入到1.5mL離心管中，加入2 μL轉染試劑與mRNA 混合,，室溫孵育3 min,。

(2)  往上述混合物中加入100 μL Opti-MEM I減血清培養(yǎng)基(無血清),，輕輕混勻,，在室溫下靜置30 min，形成轉染試劑-核酸復合物。

(3)  30 min后,，往上述復合物中加入250 μL Opti-MEM I減血清培養(yǎng)基(無血清),，輕輕混勻。

3． 轉染細胞

(1)  細胞用PBS清洗1-2次,，將上述350µL轉染試劑-mRNA復合物加入每孔細胞,。

(2)  在 37℃，5% CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)12 h,，無需更換新的培養(yǎng)液,，之后即可檢測轉染效果。若需更長時間轉染,，可在轉染12 h后補充500 μL培養(yǎng)基 (含血清),，總體積達到 500μL，即達到常規(guī)的培養(yǎng)皿使用培養(yǎng)液的量,，12-36 h后再進行檢測,。

注意事項

1.    本產(chǎn)品僅限于科學實驗研究使用，不得用于臨床診斷,、治療等領域,。

2.    mRNA質(zhì)量：請務必使用高純度、無菌,、無污染,、無內(nèi)毒素的優(yōu)質(zhì)mRNA?？梢酝ㄟ^對mRNA進行加帽(相比于Cap0結構,，帶有Cap1 結構的mRNA對于哺乳動物系統(tǒng)更適合)，使用N1-甲基-假尿苷修飾和添加poly(A)尾,，以增強mRNA的穩(wěn)定性和壽命,。

3.    整個實驗過程使用無RNA酶和無熱原性的材料，如離心管,、槍頭,、緩沖液。

4.    細胞條件：細胞狀態(tài)會極大影響轉染效率,，待轉染細胞應處于良好生長狀態(tài),，建議使用生長處于指數(shù)期、存活率大于90% 的細胞進行轉染,。如果細胞是近期復蘇的液氮凍存細胞,，請在轉染前至少傳代兩次。

5.    細胞培養(yǎng)液要求：EZ Trans mRNA轉染試劑轉染實驗要求采用無血清轉染體系(推薦使用Opti-MEM減血清培養(yǎng)基),，因為血清會影響復合物的形成及mRNA轉染效率,。

6.    由于某些特殊培養(yǎng)基中的成分可能會抑制陽離子聚合物介導的轉染,，因此建議測試這些培養(yǎng)基與本產(chǎn)品的相容性，以確保最佳轉染效果,。

7.    試劑用量的優(yōu)化：RNA 濃度和轉染試劑使用量受細胞類型及其他實驗條件影響,，初次使用應優(yōu)化mRNA 濃度和轉染試劑用量以得到最大的轉染效率。通常情況下,，24孔板的推薦mRNA用量為0.2-1 μg,，轉染試劑推薦用量為2-4 μL。建議初次使用時,，可在推薦范圍內(nèi)進行不同用量的預實驗,，以優(yōu)化轉染效果。

表 1：不同培養(yǎng)體積對應的待轉mRNA,、 EZ Trans,、稀釋液用量

注：該表使用量僅供參考，具體使用量還需根據(jù)細胞類型及其他實驗條件進行優(yōu)化,。a: 稀釋轉染試劑-mRNA復合物所需培養(yǎng)基的量,；b: 加入轉染試劑-mRNA復合物的培養(yǎng)基的量。

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本產(chǎn)品僅限于科學實驗研究使用,，不得用于臨床診斷,、治療等領域。