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產(chǎn)品描述

EZ Trans siRNA轉染試劑,，是一種基于陽離子高分子聚合物開發(fā)的新型轉染試劑，適用于siRNA 及microRNA (miRNA) 的轉染,。本產(chǎn)品能在多種常見細胞中實現(xiàn)高效率、低毒性的轉染效果,，且具有操作簡便，重復性佳等優(yōu)點,，適用于 siRNA或miRNA 介導的基因抑制實驗,。

訂購信息

運輸與保存

藍冰運輸。4℃保存,，有效期 6個月,；-30℃至-10℃保存,，有效期12個月。注：避免反復凍融,。

使用方法（以 24 孔板為例，其他培養(yǎng)皿中轉染請參考表 1）

1． 接種細胞

對于貼壁細胞：轉染前一天，將細胞按照每孔1-2x10^5個細胞的量進行鋪板,，使其在轉染時密度為60%-80% 為佳,。

對于懸浮細胞：轉染當天,，配制轉染試劑-核酸復合物之前,，用PBS清洗細胞1-2次,，用250 μL Opti-MEM I 減血清培養(yǎng)基 (無血清) 重懸細胞，在24孔板中進行細胞鋪板,，細胞密度為60-80%。

2． 準備轉染試劑-siRNA復合物（或轉染試劑-miRNA復合物）

(1)  對于每孔細胞,，取2 μLsiRNA (20 μM，DEPC水溶解)加入到1.5mL離心管中,，加入2 μL轉染試劑與siRNA 混合,，室溫孵育3 min。

(2)  往上述混合物中加入100 μL Opti-MEM I減血清培養(yǎng)基(無血清),，輕輕混勻，在室溫下靜置30 min,，形成轉染試劑-核酸復合物,。

(3)  30 min后,，往上述復合物中加入250 μLOpti-MEM I減血清培養(yǎng)基(無血清)，輕輕混勻,。

3． 轉染細胞

(1) 細胞用 PBS 清洗 1-2 次，將上述 350µL 轉染試劑-siRNA 復合物加入每孔細胞,。可在轉染 6h 后換液或者補充 150μL 培養(yǎng)基 (含血清),，總體積達到 500μL，即達到常規(guī)的培養(yǎng)皿使用培養(yǎng)液的量。

(2) 在 37℃,，5% CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng) 24-48 h，之后即可檢測基因干擾效果或者后續(xù)功能實驗,。

注意事項

1,、本產(chǎn)品僅限于科學實驗研究使用,，不得用于臨床診斷,、治療等領域,。

2,、小 RNA(siRNA/miRNA)質(zhì)量：請務必使用高純度無內(nèi)毒素轉染級 RNA,。

3,、整個實驗過程使用無 RNA 酶和無熱原性的材料,，如離心管、槍頭,、緩沖液。

4,、細胞條件：細胞狀態(tài)會極大影響轉染效率，待轉染細胞應處于良好生長狀態(tài),，建議使用生長處于指數(shù)期、存活率大于 90% 的細胞進行轉染,。如果細胞是近期復蘇的液氮凍存細胞，請在轉染前至少傳代兩次,。

5,、siRNA 與轉染試劑使用比例：對于大多數(shù)細胞系,，轉染復合物中siRNA (20 μM Stock)與轉染試劑的比例在1:1 至1:3 之間，推薦比例為1:2,。想要獲得優(yōu)的基因干擾結果,，需要對這一比例進行優(yōu)化,。

6,、由于某些特殊培養(yǎng)基中的成分可能會抑制陽離子聚合物介導的轉染，因此建議測試這些培養(yǎng)基與本產(chǎn)品的相容性,，以確保最佳轉染效果。

7、細胞類型,、基因特性、siRNA/miRNA 的效力,、靶 mRNA 的半衰期和靶蛋白的周轉率等因素都會影響siRNA/miRNA 介導的基因敲低效果,。

8,、建議 siRNA/miRNA 工作濃度在 10-100nM 之間,，轉染試劑的體積應根據(jù) siRNA/miRNA 濃度和培養(yǎng)皿的大小進行調(diào)整，請參見表 1,。

表 1：不同培養(yǎng)體積對應的待轉siRNA/miRNA、 EZ Trans,、稀釋液用量

注：該表使用量僅供參考,，具體使用量還需根據(jù)細胞類型及其他實驗條件進行優(yōu)化。a: 稀釋轉染試劑-RNA復合物所需培養(yǎng)基的量,；b: 加入轉染試劑-RNA復合物的培養(yǎng)基的量。

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