Bis-Tris蛋白預(yù)制膠的使用方法通常包括以下幾個步驟,,這些步驟可能會因不同的品牌和型號而略有差異,但總體流程大致相同:
一,、準備工作
選擇合適的預(yù)制膠:根據(jù)實驗需求,,選擇適當?shù)腂is-Tris蛋白預(yù)制膠濃度和規(guī)格。
取出預(yù)制膠:從包裝袋中取出預(yù)制膠,,并撕去底部的密封膠帶(通常為藍色或透明色),。
固定預(yù)制膠:將預(yù)制膠固定在電泳槽中,確保膠板與電泳槽的接觸面平整,,且密封良好以防止漏液,。
二、電泳緩沖液準備
準備電泳緩沖液:根據(jù)預(yù)制膠的說明,,準備適量的電泳緩沖液,。通常,,Bis-Tris蛋白預(yù)制膠使用的是MOPS或MES緩沖系統(tǒng),,而非Tris-Glycine等其他電泳緩沖液。
加入電泳緩沖液:向內(nèi)槽中加入足夠的電泳緩沖液,,確保浸沒點樣孔,;外槽中的電泳緩沖液應(yīng)至少沒過電泳槽底部的陽極,但不可漫過膠板,。
三,、上樣
處理樣品:將蛋白樣品與Loading buffer按比例混合均勻,并根據(jù)需要進行加熱處理(如使蛋白變性),。
加樣:使用移液器將處理好的蛋白樣品加入預(yù)制膠的加樣孔中,,注意避免槍頭戳破凝膠或過度插入梳孔造成漏液。同時,,注意每個加樣孔的容量限制,,以避免溢出。
四,、電泳
設(shè)置電泳條件:根據(jù)預(yù)制膠的說明或?qū)嶒炐枨?,設(shè)置合適的電泳電壓和時間。通常,,Bis-Tris蛋白預(yù)制膠的電泳條件為100150V,,電泳時間4060分鐘,。
啟動電泳:將電泳槽插上電源線,并將電源線插頭插入電泳儀電源插孔,。然后,,選擇合適的電泳條件并啟動電泳儀。
觀察電泳過程:在電泳過程中,,可以觀察溴酚藍指示帶的移動情況,,以判斷電泳的進度和是否需要調(diào)整電泳條件。
五,、凝膠取出與后續(xù)處理
電泳結(jié)束:當溴酚藍指示帶電泳至膠板底部或?qū)嶒烆A(yù)定位置時,,結(jié)束電泳。
取出凝膠:關(guān)閉電泳儀并斷開電源后,,從電泳槽中取出預(yù)制膠,。使用撬具或刀片小心插入膠板之間的空隙,撬動膠板上,、中,、下三個位置,直至膠板完全分離,。
凝膠處理:將有凝膠的膠板一側(cè)浸入水中(通常為蒸餾水),,貼著水面輕輕提起膠板,使凝膠從膠板上脫落,。然后,,將凝膠取出進行后續(xù)實驗,如染色,、成像等,。
六、注意事項
安全操作:實驗過程中應(yīng)穿實驗服并戴一次性手套操作,,確保個人安全,。
避免污染:在操作過程中,避免電泳緩沖液,、樣品等化學物質(zhì)濺入眼睛或皮膚,;同時,也要防止這些物質(zhì)污染實驗器材和凝膠,。
電泳條件調(diào)整:根據(jù)實驗需求和預(yù)制膠的說明,,可以適當調(diào)整電泳電壓和時間以獲得最佳實驗結(jié)果。
凝膠保存:如果凝膠需要保存以備后續(xù)使用,,應(yīng)將其浸泡在適當?shù)谋4嬉褐?,并儲存在低溫條件下(如4℃)。
遵循以上步驟和注意事項,可以確保Bis-Tris蛋白預(yù)制膠的正確使用和實驗結(jié)果的準確性,。
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