慢病毒載體可感染分裂細胞及非分裂細胞,。其轉(zhuǎn)移基因片段容量較大,，目的基因表達時間較長，不易引發(fā)宿主免疫反應等諸多優(yōu)點,；因此,，慢病毒己經(jīng)成為表達外源基因或外源shRNA的常用載體形式之一， 并且應用越來越廣泛,。
慢病毒濃縮液介紹
EZ慢病毒濃縮液是一種快速濃縮慢病毒的產(chǎn)品,，使用未濃縮病毒上清與本產(chǎn)品低溫孵育后低速離心即可獲得濃縮病毒液。不同于傳統(tǒng)的耗時耗力的超濾,、超速離心法,，使用本產(chǎn)品操作簡便、快捷,、安全,，回收率高。
慢病毒濃縮液優(yōu)勢
? 高濃縮比：濃縮體積高達240倍,，如：可將120mL的病毒上清濃縮至500uL,；
? 高回收率：經(jīng)測試，病毒的回收率高達92%,；
? 高濃縮滴度：經(jīng)測試,，使用本產(chǎn)品濃縮后病毒滴度往往可達108或109高病毒；
? 高病毒活性：濃縮后病毒具有更佳的轉(zhuǎn)導效果,。
慢病毒濃縮液操作步驟
① 收集 48 h 和 72 h 的 293T 細胞慢病毒上清液,，4℃， 2000 g 離心 10 min,。
② 上清液用 0.45 μm 濾膜過濾,，去除細胞碎片。【注】：濾膜需使用低蛋白吸附的纖維素醋酸酯或聚醚 砜(PES)膜,。切忌用硝酸纖維素膜(NC)。
③ 按慢病毒過濾液體積:濃縮試劑體積= 4:1 比例混合,，搖勻,，4℃ 靜置過夜，或冰上孵育至少 3 h,，適當 延長孵育時間可提高慢病毒的回收率,。
④ 完成孵育后，4℃,，3500 g 離心 15 min,，小心吸去上清液。
⑤ 用適量體積 PBS 輕輕反復吹吸病毒沉淀,，重懸慢病毒,。
⑥ 留少許病毒液測定滴度，其他分裝后保存于-80℃,?！咀ⅰ浚阂騼鋈跁@著降低慢病毒活性，請務必分 裝保存,。
慢病毒濃縮液注意事項
• 本產(chǎn)品僅限于科學實驗研究使用,，不得用于臨床診斷、治療等領域,。
• 慢病毒相關實驗操作請在生物安全柜內(nèi)完成,。
• 注意將濃縮試劑和病毒液充分混合。
• 細胞的生長狀態(tài)對于病毒包裝至關重要,，因此需保證良好的細胞生長狀態(tài)和較少的細胞傳代次數(shù),。
• 病毒切勿反復凍融，如果實在需要凍融,，次數(shù)盡量不要超過 3 次,，每凍融一次大約有 10%左右的病毒損失，應按照每次使用的病毒量來分裝,，保存于-80℃,。保存時間盡量不要超過 6 個月。
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