脂質(zhì)過氧化是脂類的氧化降解過程,，其主要由活性氧類（ROS）引發(fā),。脂質(zhì)過氧化傳感器（Lipid Peroxidation Sensor）是通過一種 C11-BODIPY 581/591 試劑的氧化來檢測活細胞中的脂質(zhì)過氧化情況,。 C11 BODIPY 581/591 本質(zhì)上是一種親脂熒光染料,，具有良好的光穩(wěn)定性、低熒光偽影特質(zhì),，能積累在膜內(nèi),。 一旦染料的多不飽和丁間二烯基被氧化，熒光最大發(fā)射波長峰值從約 ～590 nm 偏移至約 ～510 nm,，活細 胞的熒光從紅色變?yōu)榫G色,，但仍維持親脂性，從而反映膜的脂質(zhì)過氧化水平,。這種傳感器通常用于熒光顯 微鏡和流式細胞分析中,，可視化監(jiān)測脂質(zhì) ROS 的生成和動態(tài)變化。
測定原理
LPO在酸性條件下加熱,，產(chǎn)生小分子終產(chǎn)物 MDA,，MDA與TBA，生成紅色產(chǎn)物,，在 535nm有最大吸收峰,。
使用方法
1. 流式細胞分析：
(1) 懸浮細胞：800 g 離心5 min 收集細胞沉淀；隨后PBS 洗滌細胞兩遍,。
(2) 貼壁細胞：棄培養(yǎng)液,，用常溫PBS 或培養(yǎng)液輕洗細胞2 次，隨后胰酶消化,，800g 離心5 min 收集細胞沉淀,，隨后PBS 洗滌細胞兩遍，每個樣本收集1~5 ×105 個細胞,?！咀ⅰ浚翰僮鬟^程中輕柔吹打細胞，消化時間不宜過長,，劇烈吹打或胰酶消化過度會影響實驗結(jié)果,。
(3) 脂質(zhì)過氧化傳感器用于脂質(zhì)過氧化檢測的推薦濃度為終濃度5μM；配制方法：用新鮮空白培養(yǎng)液配制終濃度為5μM 的脂質(zhì)過氧化傳感器染色液待用,，DMSO 含量≤5‰,。【注】：該步操作建議在消化細胞前準備好,，以免細胞消化后久置影響實驗結(jié)果,。
(4) 將事先配置好的脂質(zhì)過氧化染色液加入收集的細胞沉淀中,，推薦體積為500μL，隨后置于37℃孵箱,，染色30min,，期間5-10min 間隔輕彈細胞使其懸浮保證染色更充分。
(5) 染色結(jié)束后,，800 g 離心5 min,，棄上清，隨后用PBS 清洗細胞2 次,，加入200μLPBS 重懸細胞用于流式分析,。
2. 原位成像：
(1) 接種適當密度的細胞于20mm 規(guī)格的蓋玻片上（也可用共聚焦小皿替代），給予實驗藥物處理適當時
(1)間后,，吸去培養(yǎng)液,，用PBS 洗滌細胞一遍；加入500 μL 配制好的脂質(zhì)過氧化染色液,，于37℃染色30min,；配制方法參考流式分析中的染色液配制。
(2) 棄培養(yǎng)液,，PBS 洗滌細胞兩遍后于熒光顯微鏡或激光共聚焦下進行成像檢測,。細胞在染色后應(yīng)在1 h
(2)之內(nèi)完成檢測。
檢測條件
該分子探針在還原狀態(tài)下最佳激發(fā)波長為 581 nm, 發(fā)射為 591nm,；被 Lipid ROS 氧化后最佳激發(fā)波長 為 500 nm,，發(fā)射在 510nm。因此,，在流式分析中檢測通道為 FL1-A,；激光共聚焦檢測：氧化態(tài)激發(fā)波長可 選 488nm（FITC）通道；還原態(tài)激發(fā)波長可選 561 nm（TRITC）通道,。
注意事項
1,、臨用前注意試劑二是否溶解，如未溶解,，可以 70℃-90℃加熱,，并振蕩以促進溶解。
2,、使用前小心離心數(shù)秒取用,，需佩戴手套操作，注意避免與皮膚,、眼睛和黏膜接觸,。
9
立即詢價
您提交后,，專屬客服將第一時間為您服務(wù)