轉(zhuǎn)染試劑是由它的體外轉(zhuǎn)染試劑加上一些專有的肽配制而成,。與傳統(tǒng)的配方相比,這款運(yùn)用了新的化學(xué)試劑,,DNA濃縮組被顯著地釋放,。主鏈上連上具有屏蔽效應(yīng)的肽,用來(lái)防止被體內(nèi)環(huán)境的干擾,,獲得高的體內(nèi)轉(zhuǎn)染效率,。
轉(zhuǎn)染試劑指真核細(xì)胞由于外源DNA摻入而獲得新的遺傳標(biāo)志的過(guò)程。哺乳動(dòng)物的轉(zhuǎn)染技術(shù)在60年代末70年代初即已引入,。DNA轉(zhuǎn)染技術(shù)的發(fā)展對(duì)現(xiàn)代分子生物學(xué)產(chǎn)生了巨大的影響,。基因轉(zhuǎn)染技術(shù)不僅是研究轉(zhuǎn)基因和基因表達(dá)的重要工具,,而且是目前基因治療的關(guān)鍵步驟,。理想的基因轉(zhuǎn)染試劑應(yīng)該具有如下特點(diǎn):1.轉(zhuǎn)染;2.安全,;3.低細(xì)胞毒性,;4.方法簡(jiǎn)單;5.省時(shí),、經(jīng)濟(jì),。
轉(zhuǎn)染試劑工作原理:脂質(zhì)體帶正電,可以靠靜電作用結(jié)合到DNA的磷酸骨架上以及帶負(fù)電的細(xì)胞膜表面,。使用陽(yáng)離子脂質(zhì)體試劑,,DNA并沒(méi)有預(yù)先包埋在脂質(zhì)體中,而是帶負(fù)電DNA自動(dòng)結(jié)合到帶正電的脂質(zhì)體上,,形成DNA-陽(yáng)離子脂質(zhì)體復(fù)合物,。
轉(zhuǎn)染試劑操作簡(jiǎn)單、快速,,為操作者節(jié)約大量操作時(shí)間,。
1. 以24孔細(xì)胞板轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)為例,推薦一次(即每孔)轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)的低內(nèi)毒素質(zhì)粒DNA用量為2µg,、轉(zhuǎn)染試劑用量為3~5µl(轉(zhuǎn)染試劑的zui適用量需要根據(jù)不同細(xì)胞和不同培養(yǎng)基來(lái)優(yōu)化,,但理論上不超出3~5µl范圍)。轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)中使用無(wú)菌生理鹽水稀釋質(zhì)粒和轉(zhuǎn)染試劑即可。
2. 為獲得zui高轉(zhuǎn)染效率并盡可能降低細(xì)胞毒性,,建議轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度控制在50~80%范圍內(nèi),,而且在不影響轉(zhuǎn)染效率的前提下,盡可能減少轉(zhuǎn)染試劑的用量,。
3. 本品極大簡(jiǎn)化了轉(zhuǎn)染步驟,,轉(zhuǎn)染試劑和質(zhì)粒混合后無(wú)需室溫靜置孵育,,可直接加入含血清的細(xì)胞培養(yǎng)基中進(jìn)行轉(zhuǎn)染,,而且無(wú)需在轉(zhuǎn)染后補(bǔ)加血清或更換培養(yǎng)基。
4. 如果實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑谟诤Y選抗藥性穩(wěn)定細(xì)胞系,,可在細(xì)胞傳代后直接進(jìn)行轉(zhuǎn)染試劑實(shí)驗(yàn),,從而節(jié)省了18~24小時(shí)的轉(zhuǎn)染前細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間,!
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