使用方法
1. PikoGreen工作液的配制
使用前將PikoGreen dsDNA定量試劑回溫至室溫；PikoGreen是以100µL 200×的濃縮液形式保存于無水DMSO中的（共10管）,，實(shí)驗(yàn)當(dāng)天,，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求用1×TE按1:200 的比例稀釋適量定量試劑濃縮液。例如要準(zhǔn)備足夠的操作溶液以2ml檢測(cè)體系測(cè)定20個(gè)樣品,，可向19.9mL 1×TE 中加入100μL PikoGreen dsDNA 定量試劑,。工作液見光易降解，盡量在配好后幾小時(shí)內(nèi)使用,。
2. 配制標(biāo)準(zhǔn)品DNA溶液
1) 用1 X TE溶液溶解dsDNA制備1μg/mL dsDNA ,。根據(jù)在1cm 光程長(zhǎng)度的比色杯中A260nm時(shí)的吸光度確定DNA 濃度；相應(yīng)于1μg/mLdsDNA 溶液A260=0.02,。標(biāo)準(zhǔn)液常用小牛胸腺DNA制備,，PikoGreen 試劑測(cè)定法在通常污染核酸制劑的幾種復(fù)合物存在的條件下仍能保持線性良好，但是,，為了得到有效的對(duì)照處理,，被用來做標(biāo)準(zhǔn)曲線的dsDNA 溶液要用和實(shí)驗(yàn)樣品相同的方式來處理，并且應(yīng)該包含相同的可能存在的污染物,。
2) 制備從0.5ng/mL 到500ng/mL（見表1）單重復(fù)8 個(gè)點(diǎn)的標(biāo)準(zhǔn)曲線,。配制一系列的標(biāo)準(zhǔn)DNA 溶液，然后與等體積的PikoGreen 工作液混和,，放入1 x 1cm 比色杯中,。混合相同體積的1 x TE 和PikoGreen 操作溶液作為空白對(duì)照,避光于室溫下放置2-5 分鐘,。
表1: 用1 x 1cm 比色杯時(shí)DNA 標(biāo)準(zhǔn)濃度配制參考
標(biāo)準(zhǔn)DNA 溶液濃度（ng/mL） | 標(biāo)準(zhǔn)DNA 溶液體積（mL） | PikoGreen 工作液體積（mL） | 標(biāo)準(zhǔn)DNA 終濃度(ng/mL) |
1000 | 1 | 1 | 500 |
200 | 1 | 1 | 100 |
50 | 1 | 1 | 25 |
20 | 1 | 1 | 10 |
5 | 1 | 1 | 2.5 |
2 | 1 | 1 | 1 |
1 | 1 | 1 | 0.5 |
0 | 1 | 1 | 空白 |
3) 當(dāng)用微量檢測(cè)皿適配器時(shí),，PikoGreen 測(cè)定也可在較低的測(cè)定體積（50μL 到200μL）內(nèi)完成。產(chǎn)生從1ng/mL 到100ng/mL（見表2）的標(biāo)準(zhǔn)曲線,，配制一系列的標(biāo)準(zhǔn)DNA 溶液,，然后與等體積的PikoGreen 工作液混和，將至少50μL 溶液轉(zhuǎn)移到微量檢測(cè)皿中,。確信不要在樣品中引入氣泡,，輕輕地彈微量檢測(cè)皿的外部經(jīng)常可以驅(qū)散氣泡,。避光于室溫下放置2-5 分鐘,。
表2：用微量檢測(cè)皿DNA 標(biāo)準(zhǔn)濃配制參考
標(biāo)準(zhǔn)DNA 溶液濃度（ng/mL） | 標(biāo)準(zhǔn)DNA 溶液體積（mL） | PikoGreen 工作液體積（mL） | 標(biāo)準(zhǔn)DNA 終濃度(ng/mL) |
200 | 30 | 30 | 100 |
50 | 30 | 30 | 25 |
20 | 30 | 30 | 10 |
5 | 30 | 30 | 2.5 |
2 | 30 | 30 | 1 |
0 | 30 | 30 | 空白 |
4) 孵育后用合適的熒光計(jì)測(cè)量樣品熒光值。Ex/Em=480nm/520nm,，為了減少光漂白,，應(yīng)保持所有樣品的檢測(cè)時(shí)間一致,。用熒光值z(mì)ui大的樣品校正儀器。
5) 用檢測(cè)數(shù)據(jù)與DNA標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度做回歸分析,，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,。
3. 樣品分析
1) 用1 x TE 稀釋待測(cè)DNA 樣品至需要的體積（1x1cm 比色杯需1.0mL，微量檢測(cè)皿需25-100μL）,。對(duì)樣品高度稀釋可以確保任何污染物都被zui大限度地沖淡,。然而，也要避免取樣體積太小而無法吸取的情況,。
2) 在每個(gè)樣品中加入等體積PikoGreen 工作液,，混合好，將混合物移入合適的比色杯,，避光于室溫下放置2-5 分鐘,。
3) 檢測(cè)、讀取熒光值,，換算樣品中dsDNA濃度,。可以對(duì)樣品進(jìn)行不同的稀釋處理重復(fù)測(cè)定以確保結(jié)果的準(zhǔn)確性,。
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