產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 | 保存 | 價格(元) |
Hoechst 33258 *超級純* | A5480L1100 | 5ml(20μM) | -20℃ | 1250 |
產(chǎn)品描述：
Hoechst 33258是一種可以穿透細胞膜的藍色熒光染料，對細胞的毒性較低,，在嵌入雙鏈DNA后釋放強烈的藍色熒光,。Hoechst 33258為特異性DNA染料，與A-T鍵結(jié)合,，這種染料對死細胞或經(jīng)70%冷乙醇固定的細胞可立即染色,。而活細胞的著色是漸進性的，在10min內(nèi)可達飽和,。在熒光顯微鏡下,，活細胞核呈彌散均勻熒光,，出現(xiàn)細胞凋亡時，細胞核或細胞質(zhì)內(nèi)可見濃染致密的顆粒塊狀熒光,。Hoechst 33258常用于細胞凋亡檢測,，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細胞儀檢測，也可以用于普通的細胞核和線粒體的顯像觀察,。
Hoechst經(jīng)常用來代替其它核酸染料如DAPI,，這兩種染料關(guān)鍵的不同點在于，與DAPI相比,，Hoechst 33258具有更強的親脂性,，因此能更好的透過完整的細胞膜。用于細胞核染色時,，推薦的Hoechst 33258工作濃度為0.5-10μg/ml,。
技術(shù)參數(shù)：
光學性質(zhì)：Ex(nm)：352 Em(nm)：461
化學參數(shù)：分子量：533.88 溶劑：Water CAS：23491-45-4
使用方法：
1.緩沖液制備。用PBS或合適的緩沖液制備10～50µM Hoechst 33258染色液,。
2.固定的細胞或組織染色,。對于固定的細胞或組織樣品，固定后,，適當洗滌去除固定劑,。依次按步驟進行免疫熒光染色，和Hoechst33258染色,。如果不進行免疫熒光染色,，則直接按步驟進行Hoechst33258染色。
a)對于貼壁細胞或組織切片：加入適量Hoechst 33258染色液,，覆蓋住樣品即可,。對于懸浮細胞：至少加入待測染色樣品體積3倍的染色液，混勻,。室溫放置3-5分鐘,。
b)吸除Hoechst 33258染色液，用TBST,、PBS或生理鹽水洗滌2-3次,，每次3-5分鐘。
c)直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察,。激發(fā)波長350nm,，發(fā)射波長460nm。
3.活細胞或組織染色
a)細胞培養(yǎng)物中加入適量Hoechst 33258染色液,，約1/10細胞培養(yǎng)基體積,，必須充分覆蓋住待染色的樣品。通常對于六孔板一個孔需加入1ml染色液，對于96孔板一個孔需加入100μl染色液,。
b)在37℃培養(yǎng)細胞10～20分鐘,。
c)用PBS或合適的緩沖液洗細胞兩次。
d)直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察,。激發(fā)波長350nm,，發(fā)射波長460nm。,。
運輸與保存方法：
冰袋（wet ice）運輸,。-20℃干燥避光保存，保質(zhì)期12個月,。
注意事項
1. Hoechst 33258溶于水,，溶解度可達20μM(約10mg/ml),。您也可直接購買20μM的液體規(guī)格產(chǎn)品（貨號:C5480L1100）,。
2. Hoechst 33258對人體有一定刺激性，請注意適當防護,。
3. 熒光染料都存在淬滅的問題,，建議染色后盡量當天完成檢測。
4. 為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液,。
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