產(chǎn)品名稱(chēng) | 貨號(hào) | 規(guī)格 | 保存 | 價(jià)格(元) |
Hoechst 33258 *超級(jí)純* | A5480L1100 | 5ml(20μM) | -20℃ | 1250 |
產(chǎn)品描述：
Hoechst 33258是一種可以穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光染料,，對(duì)細(xì)胞的毒性較低,，在嵌入雙鏈DNA后釋放強(qiáng)烈的藍(lán)色熒光。Hoechst 33258為特異性DNA染料,，與A-T鍵結(jié)合,，這種染料對(duì)死細(xì)胞或經(jīng)70%冷乙醇固定的細(xì)胞可立即染色。而活細(xì)胞的著色是漸進(jìn)性的,，在10min內(nèi)可達(dá)飽和,。在熒光顯微鏡下，活細(xì)胞核呈彌散均勻熒光,，出現(xiàn)細(xì)胞凋亡時(shí),，細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)濃染致密的顆粒塊狀熒光。Hoechst 33258常用于細(xì)胞凋亡檢測(cè),，染色后用熒光顯微鏡觀(guān)察或流式細(xì)胞儀檢測(cè),，也可以用于普通的細(xì)胞核和線(xiàn)粒體的顯像觀(guān)察。
Hoechst經(jīng)常用來(lái)代替其它核酸染料如DAPI,，這兩種染料關(guān)鍵的不同點(diǎn)在于,，與DAPI相比，Hoechst 33258具有更強(qiáng)的親脂性,，因此能更好的透過(guò)完整的細(xì)胞膜,。用于細(xì)胞核染色時(shí)，推薦的Hoechst 33258工作濃度為0.5-10μg/ml,。
技術(shù)參數(shù)：
光學(xué)性質(zhì)：Ex(nm)：352 Em(nm)：461
化學(xué)參數(shù)：分子量：533.88 溶劑：Water CAS：23491-45-4
使用方法：
1.緩沖液制備,。用PBS或合適的緩沖液制備10～50µM Hoechst 33258染色液。
2.固定的細(xì)胞或組織染色,。對(duì)于固定的細(xì)胞或組織樣品,，固定后，適當(dāng)洗滌去除固定劑,。依次按步驟進(jìn)行免疫熒光染色,，和Hoechst33258染色。如果不進(jìn)行免疫熒光染色,，則直接按步驟進(jìn)行Hoechst33258染色,。
a)對(duì)于貼壁細(xì)胞或組織切片：加入適量Hoechst 33258染色液，覆蓋住樣品即可,。對(duì)于懸浮細(xì)胞：至少加入待測(cè)染色樣品體積3倍的染色液,，混勻,。室溫放置3-5分鐘。
b)吸除Hoechst 33258染色液,，用TBST,、PBS或生理鹽水洗滌2-3次,，每次3-5分鐘,。
c)直接在熒光顯微鏡下觀(guān)察或封片后熒光顯微鏡下觀(guān)察。激發(fā)波長(zhǎng)350nm,，發(fā)射波長(zhǎng)460nm,。
3.活細(xì)胞或組織染色
a)細(xì)胞培養(yǎng)物中加入適量Hoechst 33258染色液，約1/10細(xì)胞培養(yǎng)基體積,，必須充分覆蓋住待染色的樣品,。通常對(duì)于六孔板一個(gè)孔需加入1ml染色液，對(duì)于96孔板一個(gè)孔需加入100μl染色液,。
b)在37℃培養(yǎng)細(xì)胞10～20分鐘,。
c)用PBS或合適的緩沖液洗細(xì)胞兩次。
d)直接在熒光顯微鏡下觀(guān)察或封片后熒光顯微鏡下觀(guān)察,。激發(fā)波長(zhǎng)350nm,，發(fā)射波長(zhǎng)460nm。,。
運(yùn)輸與保存方法：
冰袋（wet ice）運(yùn)輸,。-20℃干燥避光保存，保質(zhì)期12個(gè)月,。
注意事項(xiàng)
1. Hoechst 33258溶于水,，溶解度可達(dá)20μM(約10mg/ml)。您也可直接購(gòu)買(mǎi)20μM的液體規(guī)格產(chǎn)品（貨號(hào):C5480L1100）,。
2. Hoechst 33258對(duì)人體有一定刺激性,，請(qǐng)注意適當(dāng)防護(hù)。
3. 熒光染料都存在淬滅的問(wèn)題,，建議染色后盡量當(dāng)天完成檢測(cè),。
4. 為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液。
提供商 |
和元李記（上海）生物技術(shù)有限公司 | 下載次數(shù) |
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資料大小 |
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