產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 | 保存 | 價格(元) |
CFDA, SE 細胞增殖示蹤熒光探針 | 4100L1011 | 25mg | -20℃ | 1550 |
熒光標記細胞已被廣泛證實可有效確定總細胞的數(shù)量和一個樣本中存在多少活細胞,。流式細胞術(shù)結(jié)合熒光染色法是分析非均質(zhì)細胞種群的有力工具,。非熒光性的FDA和它的衍生物分子進入細胞后被胞內(nèi)無特異性的酯酶所水解產(chǎn)生熒光。這些熒光產(chǎn)物只能積聚在具有完整細胞膜的細胞中,。因此,，死細胞無完整細胞膜不能被染色。FDA及其類似物（如CDCFDA）精細的跨膜動力學(xué)以及胞內(nèi)水解特點與細胞功能相關(guān),，因此FDA標記可以通過熒光顯微鏡或者流式細胞儀來檢測細胞,。然而，因為CFSE和它的熒光類似物與GFP或者FITC具有相同的激發(fā)光譜,，因此CFSE和它的熒光類似物不能用于GFP轉(zhuǎn)染細胞或者FITC標記抗體的應(yīng)用中,。VFSE染料與CFSE功能相似，因為它們都包含酯酶切割和胺反應(yīng)的SE基團,。VFSE染料能用于多色反應(yīng),，因為VFSE與CFSE和它的熒光類似物具有不一樣的激發(fā)和發(fā)射光譜,， 因此可以用于GFP轉(zhuǎn)染細胞或者FITC標記抗體的應(yīng)用中。
常用名 | CDCFDA | ||
中文名稱 | 活細胞熒光示蹤探針 | ||
英文名稱 | 5-(and-6)-Carboxy-2',7'-dichlorofluorescein diacetate, succinimidyl ester | ||
CAS# | / | 分子式 | C29H19 |
分子量 | 626.35 | 純度 | ≥95%（HPLC） |
Ex(nm) | 504 | Em(nm) | 529 |
結(jié)構(gòu)式 |
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運輸與保存方法
常溫運輸,，-20℃干燥避光保存,，保質(zhì)期24個月。避免反復(fù)多次凍融,。
使用方法
1.保存液配制（5mM）
按需配制,，如取DMSO 360μL，溶解1mg CDCFDA,，超音波溶解,，得到5mM 保存液；將其按40μL體積分裝于避光的無菌凍存管中,，-20℃可保存2個月,。
注意：CDCFDA遇水容易分解，所以在配置時候要用無水DMSO,，配置后計算用量盡快使用,，多余的立刻避光保存-20℃。DMSO是有機溶劑,，對于蛋白質(zhì)會有損傷,，所以在配置的時候DMSO用量越少越好；
2. 工作液配制
取5mM的CDCFDA稀釋液1 ul,，加入1ml 10％FCS 的PBS稀釋,。
3.染色
a.重懸細胞。用有5％FCS的PBS重懸細胞,，細胞濃度一般為1x1x106/ml （體外實驗）或1x1x107/ml（轉(zhuǎn)染實驗）,。
b.染色。1ml DFSE工作液與1ml細胞懸液混合后37℃孵育5－10分鐘,。期間輕輕混勻兩次（用手輕彈管壁,，切忌吹打）。
c.終止染色,。用*培養(yǎng)液洗滌3次并離心,。一般在第2次洗滌后再孵育5分鐘后進行第3次洗滌。冰冷的含10 %新生牛血清RPMI1640（先加入1ml混勻 ,，然后續(xù)加入7ml）, 輕輕混勻1min（用手輕彈,，切忌吹打）,1 500 r/ min 離心5 min。
d.流式細胞儀在FL1通道檢測,。
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