產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 | 保存 | 價格(元) |
SmartCell 線粒體染色試劑盒Orange(同Mitotracker Orange) | C6244L0553 | 500 assays | -20℃ | 2450 |
產(chǎn)品描述
線粒體(mitochondrion)是一種存在于大多數(shù)真核細(xì)胞中的兩層膜結(jié)構(gòu)的細(xì)胞器,，是細(xì)胞中的“能量工廠”(cellular power plants)",生產(chǎn)了細(xì)胞所需的大部分ATP,，除了為細(xì)胞提供能量外，還涉及諸如細(xì)胞分化,、細(xì)胞信息傳遞和細(xì)胞凋亡等過程，并擁有調(diào)控細(xì)胞生長和細(xì)胞周期的能力,。已有文獻(xiàn)報(bào)道,，線粒體還與線粒體失調(diào)癥,、心臟功能障礙,、衰老等人類疾病有關(guān),。盡管大部分細(xì)胞遺傳物質(zhì)DNA在細(xì)胞核內(nèi)，但線粒體擁有獨(dú)立的基因組,，呈現(xiàn)母性遺傳,。基于以上特點(diǎn)，線粒體是生物,、生命科技領(lǐng)域的研究熱點(diǎn),。
Smart Cell染色試劑盒是Life-iLab公司專門研發(fā)的一類熒光成像工具,，試劑盒設(shè)計(jì)嚴(yán)謹(jǐn)，需人為手動操作的步驟很少,。可用來標(biāo)記細(xì)胞器、亞細(xì)胞等結(jié)構(gòu),，例如細(xì)胞膜,、線粒體,、線粒體和細(xì)胞核等。
Smart Cell線粒體染色試劑盒可以標(biāo)記活細(xì)胞中的線粒體,，使之帶橙色熒光(Ex/Em =545/575 nm)。本試劑盒使用染料為一種疏水性復(fù)合物,，屬線粒體選擇性染料,，該染料能輕易進(jìn)入活細(xì)胞內(nèi)，通過線粒體膜電位變化滲透進(jìn)入線粒體,，并在線粒體中富集,。Smart Cell線粒體染色試劑盒提供了標(biāo)記線粒體的全套試劑,，能提供藍(lán)色/綠色/紅色/橙色等不同熒光供選擇，既可單獨(dú)使用,，也支持對細(xì)胞的多重?zé)晒夥治?/span>,。這種的細(xì)胞標(biāo)簽為從空間上和時間上研究發(fā)生的細(xì)胞活動提供了一種十分有效的方法。
試劑盒組分
組分 | 數(shù)量 |
Component A: MitoView Orange染料 | 100 µL (500 X DMSO stock solution) |
Component B: 活細(xì)胞染色緩沖液 | 50 mL |
使用方法
1. 準(zhǔn)備線粒體染色液
1.1 室溫避光放置5-10分鐘,，預(yù)熱MitoView Orange染料(Component A)。
1.2 取20µL預(yù)熱好的MitoView Orange染料(Component A),，用10 mL活細(xì)胞染色緩沖液(Component B)進(jìn)行稀釋,。
注意：1) 20μL MitoView Orange染料(Component A)足夠完成1塊96孔板實(shí)驗(yàn),，剩余的MitoView Orange染料(Component A) 可以根據(jù)需要分裝避光保存于-20℃，避免反復(fù)凍融,。2)*染料濃度根據(jù)具體應(yīng)用會有不同,，染色條件根據(jù)細(xì)胞類型、細(xì)胞或組織的染料滲透性不同可以進(jìn)行調(diào)整優(yōu)化,。
2. 細(xì)胞染色
2.1 貼壁細(xì)胞：在96孔板（100μL）或培養(yǎng)皿內(nèi)培養(yǎng)細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞達(dá)到70-80%融合度,，在96孔板或培養(yǎng)皿內(nèi)添加等體積的染色工作液(步驟1.2),，在37°C, 5% CO2條件下培養(yǎng)細(xì)胞30分鐘-2小時,。用HHBS [含20mM Hepes的Hanks緩沖液]或用自配Buffer(Hanks Buffer 與生長培養(yǎng)基按1:1)替換色染液。同TRITC設(shè)置在顯微鏡下進(jìn)行熒光觀察,。
注意：如果細(xì)胞沒有充分染色,，可以適當(dāng)增加染料濃度或增加染色時間進(jìn)行改善
2.2 懸浮細(xì)胞: 在1000 rpm 條件下離心細(xì)胞培養(yǎng)液5分鐘,，棄去上清，用預(yù)熱好的細(xì)胞培養(yǎng)液溫和的重懸細(xì)胞,，然后添加等體積的染色工作液(步驟1.2),，在37°C, 5% CO2條件下培養(yǎng)細(xì)胞30分鐘-2小時,。用HHBS [含20mM Hepes的Hanks緩沖液]或用自配Buffer(Hanks Buffer 與生長培養(yǎng)基按1:1)替換色染液。同TRITC設(shè)置在顯微鏡下進(jìn)行熒光觀察,。
圖1：HeLa 細(xì)胞用SmartCell線粒體染色試劑盒Orange染色后進(jìn)行成像分析
（所用96孔板為Costar black）
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