產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 | 保存 | 價格(元) |
SmartCell溶酶體染色試劑盒*NIR* | C6244L0561 | 500 assays | -20℃ | 2450 |
產(chǎn)品描述
溶酶體是細胞內(nèi)具有單層膜囊狀結(jié)構(gòu)的細胞器,，溶酶體被比喻為細胞內(nèi)的“酶倉庫”或“消化系統(tǒng)”，溶酶體內(nèi)含有許多種水解酶類,，能夠?qū)⒓毎淌蛇M的食物或致病菌等大顆粒物質(zhì)消化成生物大分子,，殘渣通過外排作用排出細胞，分解很多種物質(zhì),，也能在細胞分化過程中,，將陷入溶酶體內(nèi)的某些衰老細胞器和生物大分子消化。溶酶體膜內(nèi)pH值約4.5-4.8,，使得消化酶類可以在酸性條件下工作,，溶酶體外的胞質(zhì)內(nèi)，pH值為7.2左右,，溶酶體膜通過從胞質(zhì)泵入H+維持溶酶體內(nèi)外這種pH差異,。
Smart Cell溶酶體染色試劑盒*NIR*可以標記活細胞中的溶酶體，使之帶紅色熒光(Ex/Em =636/650 nm),。本試劑盒使用染料為一種疏水性復(fù)合物,，屬趨溶酶體染料，染料滲透進入完整的活細胞中,，有選擇性進入溶酶體,，并因溶酶體膜內(nèi)外的不同pH環(huán)境而被鎖定在溶酶體中。染料一旦進入溶酶體中,，熒光顯著性增強并非常穩(wěn)定,。基于這一特點,，本試劑盒可以用于酶標版,、免疫組化和流式細胞技術(shù)等應(yīng)用，用于多種不同類型的研究中,，包括細胞粘附性,、趨化性、多藥物抗性、細胞活性,、細胞凋亡和細胞毒性的研究,，適用于增殖型和非增殖型細胞，也可以用于懸浮和貼壁細胞,。
Smart Cell溶酶體染色試劑盒是Life-iLab公司專門研發(fā)的一類熒光成像工具,，試劑盒設(shè)計嚴謹，需人為手動操作的步驟很少,。可用來標記細胞器,、亞細胞等結(jié)構(gòu)，例如細胞膜,、溶酶體,、溶酶體和細胞核等。Smart Cell溶酶體染色試劑盒提供了標記溶酶體的全套試劑,，針對每種細胞結(jié)構(gòu)都能提供藍色/綠色/紅色/橙色等不同熒光供選擇,，既可單獨使用，也支持對細胞的多重熒光分析,。這種的細胞標簽為從空間上和時間上研究發(fā)生的細胞活動提供了一種十分有效的方法,。
試劑盒組分
組分 | 數(shù)量 |
Component A: LysoBrite NIR染料 | 100 µL (500 X DMSO stock solution) |
Component B: 活細胞染色緩沖液 | 50 mL |
使用方法
1. 準備溶酶體染色液
1.1 室溫避光放置5-10分鐘,，預(yù)熱LysoBrite NIR染料(Component A),。
1.2 取20µL預(yù)熱好的LysoBrite NIR染料(Component A)，用10 mL活細胞染色緩沖液(Component B)進行稀釋,。
注意：1) 20μL LysoBrite NIR染料(Component A)足夠完成1塊96孔板實驗,，剩余的LysoBrite NIR染料(Component A) 可以根據(jù)需要分裝避光保存于-20℃，避免反復(fù)凍融,。2)*染料濃度根據(jù)具體應(yīng)用會有不同,，染色條件根據(jù)細胞類型、細胞或組織的染料滲透性不同可以進行調(diào)整優(yōu)化,。
2. 細胞染色
2.1 貼壁細胞：在96孔板（100μL）或培養(yǎng)皿內(nèi)培養(yǎng)細胞,，當細胞達到70-80%融合度，在96孔板或培養(yǎng)皿內(nèi)添加等體積的染色工作液(步驟1.2),，在37°C, 5% CO2條件下培養(yǎng)細胞30分鐘-2小時,。用 Cy5濾光片在顯微鏡下進行熒光觀察。
注意：如果細胞沒有充分染色,，可以適當增加染料濃度或增加染色時間進行改善
2.2 懸浮細胞: 在1000 rpm 條件下離心細胞培養(yǎng)液5分鐘,，棄去上清，用預(yù)熱好的細胞培養(yǎng)液溫和的重懸細胞,，然后添加等體積的染色工作液(步驟1.2),，在37°C, 5% CO2條件下培養(yǎng)細胞30分鐘-2小時。用 Cy5濾光片在顯微鏡下進行熒光觀察。
圖1：U2OS 細胞用SmartCell溶酶體染色試劑盒*NIR*染色后進行成像分析
（所用96孔板為Costar black）
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