產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 | 保存 | 價格(元) |
EZ ECL 增強型化學發(fā)光液 | D3030L1260 | 100 mL | 4℃ | 300 |
產(chǎn)品描述
《EZ ECL 增強型化學發(fā)光液》用于檢測直接或間接標記辣根過氧化物酶HRP的抗體及其關(guān)聯(lián)的抗原,。由于采用了*的發(fā)光底物系統(tǒng),，可使用更高的抗體稀釋倍數(shù)(1:2000～1:10000)，極其節(jié)省抗體, 可檢測低皮克級的蛋白,，操作步驟無需進行特別優(yōu)化,。靈敏度高，信號持續(xù)時間長達5小時,，不但適用于X射線膠片,、也可用CCD或激光成像儀成像。
產(chǎn)品組分
組分名稱 | 產(chǎn)品貨號規(guī)格及組分 | |
D3030L1260（100ml） | D3030L1261（500ml） | |
A液 | 50ml | 250ml |
B液 | 50ml | 250ml |
運輸與保存方法
常溫運輸,。收到貨后4℃避光干燥保存,，1年有效。
使用方法
1. 執(zhí)行常規(guī)SDS-PAGE,、轉(zhuǎn)膜,、洗膜。注意用HRP標記lgG或用一抗-鏈親和素-生物素-HRP夾法,。
注：1) 推薦將一抗?jié)舛认♂尩?.5ug/ml（0.05～1ug/ml均可）,；
2) 將二抗?jié)舛认♂尩?.02ug/mL（0.005～0.04ug/mL均可）。
2. zui后1次洗膜的同時,，新鮮配制發(fā)光工作液：根據(jù)用量將兩種組份按1:1比例混合均勻,，備用。
注：1）短時間暴露于日光燈下不會損害該工作液,，但為獲得*結(jié)果,，將此工作液保存在棕色瓶中，避免暴露于任何強光,。
2）取A液和B液一定要用不同的槍頭,，工作液現(xiàn)配現(xiàn)用，室溫放置數(shù)小時后仍可使用但靈敏度略有降低,。
3. 用平頭鑷取出膜,，搭在濾紙上瀝干洗液，勿使膜*干燥,。用移液器將工作液加到膜上（推薦150μl發(fā)光液/cm2膜）,，使之充分接觸。室溫孵育5分鐘，準備立即壓片曝光,。
4. 用平頭鑷子夾起膜,，膜的下緣輕輕接觸吸水紙，去除膜上多余的液體,，留下少量工作液,，不可讓膜*干燥。
5. 在X光膠片暗盒內(nèi)表面鋪一張面積大于膜的保鮮膜,。將印跡膜貼在保鮮膜上,，將保鮮膜折起來*包裹印跡膜，去除氣泡和皺褶,，可剪去邊緣部多余的保鮮膜,。用濾紙吸去多余的發(fā)光工作液。用膠帶將覆蓋印跡膜的保鮮膜固定在暗盒內(nèi),，蛋白條帶面向上,。
6. 在黑暗中將X感光膠片放置在包裹的保鮮膜上，根據(jù)蛋白濃度曝光適當時間（根據(jù)光強度需摸索曝光時間,，一般30s-2min）,，顯影沖洗。
注：根據(jù)經(jīng)驗,，如果背景過高,，可使用兩張X感光膠片同時壓片。
注意事項
（1）步驟1～5可在日光燈下操作,；但發(fā)光液曝露于強光下時間過久靈敏度可能略有降低,，移到暗房操作可避免之。戴手套可以避免在膜上留下手印,。
（2）長時間曝光或蛋白過量,，將加深背景并使條帶強弱變化失去線性關(guān)系。曝光不足則條帶模糊,。
（3）發(fā)光工作液孵育約3分鐘后膜上的條帶發(fā)光,。強條帶發(fā)光在暗房中肉眼可見，低豐度蛋白條帶發(fā)光較弱甚至肉眼不可見但可使X光膠片曝光,。不能簡單以肉眼觀察判斷條帶發(fā)光時間,。肉眼不可見的熒光實際上可持續(xù)數(shù)小時并使X光膠片感光，因而弱帶可曝光1-10小時,。如果曝光后條帶不佳,，可用洗膜緩沖液洗膜，重新孵育二抗,，然后重新用ECL發(fā)光和曝光。
（4）由于超敏發(fā)光液極其靈敏，強烈推薦大多數(shù)進口抗體起始濃度為一抗1:1000～1:4000,，二抗1:2000～1:5000,。抗體濃度過高將造成高背景或沒有條帶,，導致失敗,。
（5）某些保鮮膜包裹印跡膜時可能會淬滅熒光，應選擇高質(zhì)量保鮮膜,。
（6）使用肉眼可見的預染色蛋白Marker和熒光-放射自顯影曝光標簽可確定膠片上條帶的位置和大小,。
（7）NaN3能抑制HRP活性，回收第二抗體應避免使用NaN3,，如必需使用勿超過0.01%,。
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