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產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 | 保存 | 價格(元) |
Recombinant Enterokinase重組腸激酶 | D2101L1001 | 500 U | -20℃ | 1050 |
產(chǎn)品簡介
腸激酶（Enterokinase）是一種絲氨酸蛋白酶，高度專一性識別Asp-Asp-Asp-Asp-Lys序列,，在Lys的C端水解多肽/融合蛋白,，去除融合標簽，釋放出目的蛋白,。但天然腸激酶來源有限，并且從動物組織提取的腸激酶污染有其他蛋白酶,，這給實際應用帶來了困難,。重組腸激酶（rEK）是高純度的牛腸激酶輕鏈亞基，它有著和天然提取的腸激酶同樣特異的切割酶活性,，且切割速率更快,。重組腸激酶（rEK）被廣泛地應用于基因工程產(chǎn)品的開發(fā)，其應用之一是作為工具蛋白酶用于重組融合蛋白質(zhì)的特異性斷裂,，尤其適用于生物工程制藥業(yè)及基因工程,、生物化學、分子生物學等研究,。
本產(chǎn)品為采用重組酵母分泌表達的高純度,、高活性的牛腸激酶，適用范圍廣（4～45℃,，pH4.5～9.5）,，并且在各種去垢劑和變性劑存在的條件下仍具有部分活性。因經(jīng)多次柱純化,，SDS-PAGE膠檢測僅可見清晰單一的目的條帶,。本制品不含有非特異性的蛋白酶切活性,。
技術參數(shù)
來源（Source） | 重組酵母Yeast |
分子量（Molecular Weight） | 理論值25.850 kDa |
外觀（Appearance） | 透明液體 |
酶濃度（Enzyme Concentration） | 4U/uL |
活性定義（Activity Definition） | 在37℃，16小時內(nèi)將0.5毫克的Thioredoxin-NP-27 95%降解為NP-27所需要的酶量定義為1個活性單位(1U) ,。 |
內(nèi)毒素檢測（Endotoxin） | 用LAL法測定內(nèi)毒素含量小于1EU/μg |
質(zhì)量保證（Quality assurance） | 經(jīng)多次柱純化,，SDS-PAGE膠檢測僅可見清晰單一的目的條帶；本制品中不含有非特異性的蛋白酶切活性,。 |
運輸與保存方法
-20℃保存,，冰袋運輸。質(zhì)保期12個月
使用方法（參考舉例）
1. 反應體系構(gòu)建,，以1000μl為例,，反應體系如下：
融合蛋白 | 0.5-1mg(蛋白濃度：0.1-1mg/ml) |
Recombinant Enterokinase重組腸激酶 | 0.5-2.5 uL (相當于2-10U) |
10 x rEK反應緩沖液 | 100μL |
超純水 | 根據(jù)需要補充體積到1000μl |
注：10 x rEK反應緩沖液配方：0.5M Tris-HCl，pH 8.0（22℃）,，10mM CaCl,，1% Tween-20。
2. 酶切反應,， 25 °C過夜酶切,。
3. （可選）重組腸激酶的去除，后續(xù)如需去除重組腸激酶,，可用陰離子交換樹脂（eg.DEAE-FF）對其進行洗脫,。推薦洗脫條件如下：
平衡緩沖液：25mM Tris-HCl pH8.0
洗脫緩沖液：25mM Tris-HCl pH8.0，含100mM NaCl
注：① 如果使用純化柱,，注意流速不要太快,。確保樣品與膠的接觸時間不少于10min。也可以直接將膠加入到酶切緩沖液中直接動態(tài)吸附30min,。② 如酶切緩沖液中含有其他成分,，如NaCl，甘油等,，會影響吸附效果,。
注意事項
1．如果樣品溶液中含如下成分的一種或多種，且含量大于所列數(shù)值,，為獲得理想的酶切結(jié)果,，請先將樣品透析到1×反應緩沖液中，然后再進行酶切實驗,。
>2M Urea,，>250mM NaCl，>20mM β-ME,，>0.1% SDS,，>50mM imidazole。
2）磷酸鹽對Enterokinase有很強的抑制作用,，痕量的磷酸鹽都會嚴重影響Enterokinase的活性,，因此在酶切體系內(nèi)不能存在磷酸鹽,。
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