半制備/制備型高效液相色譜柱的系統(tǒng)由儲(chǔ)液器,、泵、進(jìn)樣器,、色譜柱,、檢測(cè)器、記錄儀等幾部分組成,。儲(chǔ)液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統(tǒng),樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相,被流動(dòng)相載入色譜柱(固定相) 內(nèi), 由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù), 在兩相中作相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí), 經(jīng)過反復(fù)多次的吸附- 解吸的分配過程, 各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別, 被分離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出, 通過檢測(cè)器時(shí), 樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號(hào)傳送到記錄儀,數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來(lái),。

    半制備/制備型高效液相色譜柱的使用和維護(hù)：

    在日常分離分析工作中，色譜柱的正確使用和維護(hù)十分重要，色譜柱使用是否得當(dāng),，直接影響色譜柱的壽命,，稍有不慎就會(huì)降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞,。在色譜操作過程中,，需要注意下列問題，以維護(hù)色譜柱,。

    （1） 柱子在裝卸,、更換時(shí)，動(dòng)作要輕,，接頭擰緊要適度,。必須防止較強(qiáng)的機(jī)械振動(dòng)，以免柱床產(chǎn)生空隙,。

    （2） 如果儀器用來(lái)做常規(guī)分析,，樣品種類有限，但分析次數(shù)多,，則不妨為每一類常規(guī)分析配置一根柱,，這樣有助于延長(zhǎng)柱子的壽命。

    （3） 避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動(dòng),。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會(huì)影響柱內(nèi)的填充狀況;柱壓的突然升高或降低也會(huì)沖動(dòng)柱內(nèi)填料,，因此在調(diào)節(jié)流速時(shí)應(yīng)該緩慢進(jìn)行，在閥進(jìn)樣時(shí)閥的轉(zhuǎn)動(dòng)不能過緩,。

    （4） 應(yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成,，特別是反相色譜中，不應(yīng)直接從有機(jī)溶劑改變?yōu)槿渴撬?，反之亦然?/p>

    （5） 如使用柱溫控制裝置時(shí),，應(yīng)注意在通人流動(dòng)相后才能升溫。

    （6） 一般說來(lái)色譜柱不能反沖,，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時(shí),，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會(huì)迅速降低柱效,。

    （7） 選擇使用適宜的流動(dòng)相,，以避免固定相被破壞。有時(shí)可以在進(jìn)樣器前面連接一個(gè)預(yù)柱,，分析柱是鍵合硅膠時(shí),，預(yù)柱為硅膠，可使流動(dòng)相在進(jìn)入分析柱之前預(yù)先被硅膠“飽和”,，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解,。

    （8） 避免將基質(zhì)復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注人柱內(nèi),，需要對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理或者在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一個(gè)保護(hù)柱。保護(hù)柱一般是填有相似固定相的短柱,。保護(hù)柱可以而且應(yīng)該經(jīng)常更換,。

    （9） 經(jīng)常用強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱，清除保留在柱內(nèi)的雜質(zhì),。在進(jìn)行清洗時(shí),，對(duì)流路系統(tǒng)中流動(dòng)相的置換應(yīng)以相混溶的溶劑逐漸過渡，每種流動(dòng)相的體積應(yīng)是柱體積的20倍左右,，即常規(guī)分析需要50-75mL,。

    （10） 保存色譜柱時(shí)應(yīng)將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊,，防止溶劑揮發(fā)干燥,。禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置或更長(zhǎng)時(shí)間。

    （11） 色譜柱使用過程中,，如果壓力升高,，一種可能是燒結(jié)濾片被堵塞，這時(shí)應(yīng)更換濾片或?qū)⑵淙〕鲞M(jìn)行清洗,；另一種可能是大分子進(jìn)人柱內(nèi),，使柱頭被污染;如果柱效降低或色譜峰變形，則可能柱頭出現(xiàn)塌陷,，死體積增大,。

    （12） 在完成分離分析工作之后，不應(yīng)立即停機(jī),，需及時(shí)對(duì)色譜分析系統(tǒng)進(jìn)行沖洗,，一般0.5h以上，以除去色譜柱內(nèi)的雜質(zhì),。

    使用注意：

    拿到一根新柱時(shí),，一定要先看其使說明，然后測(cè)柱效,，定期檢測(cè)柱效,， 保留在新色譜柱上得到的色譜圖，并記錄條件,， 定期檢測(cè)儀器的譜帶展寬,。 若應(yīng)用于在線監(jiān)測(cè)， 應(yīng)對(duì)色譜柱提供在線的物理保護(hù)和化學(xué)保護(hù),， 例如采取安裝在線過濾器， 自裝填料保護(hù)柱和預(yù)裝保護(hù)柱等,。在線過濾器的作用是防止顆粒在柱頭累計(jì),，優(yōu)點(diǎn)是基本不影響柱效,， 在需要高柱效的時(shí)候常用， 常更換的消耗品是濾芯和墊圈保護(hù)柱的作用是防止柱子被化學(xué)污染,。 缺點(diǎn)是多數(shù)保護(hù)柱影響色譜柱的柱效,， 特別是在用微柱時(shí)，常用的是普通 自裝填料的保護(hù)柱,。