高效液相色譜儀是一種技術(shù)分析儀器,,能夠提供更快的運(yùn)行、更高的分離度以及更高的通量,,滿(mǎn)足更多實(shí)驗(yàn)室各種不同應(yīng)用的需求,。高效液相色譜儀系統(tǒng)能夠在運(yùn)行和數(shù)據(jù)管理提供了完整的解決方案。
高效液相色譜法只要求樣品能制成溶液,,不受樣品揮發(fā)性的限制,,流動(dòng)相可選擇的范圍寬,固定相的種類(lèi)繁多,,因而可以分離熱不穩(wěn)定和非揮發(fā)性的,、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質(zhì)。
高效液相色譜運(yùn)行高效液相色譜可以以多種模式進(jìn)行,。常用的方法稱(chēng)為反相,,在這種模式下,化合物從極性強(qiáng)的化合物開(kāi)始,,到非極性化合物結(jié)束,。對(duì)于正相模式,高功率泵將樣品和流動(dòng)相移動(dòng)通過(guò)色譜柱,,運(yùn)行可能需要 10-60 分鐘,。
與試樣預(yù)處理技術(shù)相配合,HPLC 所達(dá)到的高分辨率和高靈敏度,,使分離和同時(shí)測(cè)定性質(zhì)上十分相近的物質(zhì)成為可能,,能夠分離復(fù)雜相體中的微量成分。隨著固定相的發(fā)展,,有可能在充分保持生化物質(zhì)活性的條件下完成其分離,。
由于HPLC具有高分辨率、高靈敏度,、速度快,、色譜柱可反復(fù)利用,流出組分易收集等優(yōu)點(diǎn),,因而被廣泛應(yīng)用到生物化學(xué),、食品分析、醫(yī)藥研究,、環(huán)境分析,、無(wú)機(jī)分析等各種領(lǐng)域。高效液相色譜儀與結(jié)構(gòu)儀器的聯(lián)用是一個(gè)重要的發(fā)展方向,。
液相色譜- 質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)受到普遍重視,如分析氨基甲酸酯農(nóng)藥和多核芳烴等,; 液相色譜- 紅外光譜聯(lián)用也發(fā)展很快,,如在環(huán)境污染分析測(cè)定水中的烴類(lèi),,海水中的不揮發(fā)烴類(lèi),使環(huán)境污染分析得到新的發(fā)展,。
高效液相色譜儀般由溶劑輸送系統(tǒng),、進(jìn)樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)(色譜柱),、檢測(cè)系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理與記錄系統(tǒng)組成,,具體包括儲(chǔ)液器、輸液泵,、進(jìn)樣器,、色譜柱、檢測(cè)器,、記錄儀或數(shù)據(jù)工作站等幾部分,。
其整體組成類(lèi)似于氣相色譜,但是針對(duì)其流動(dòng)相為液體的特點(diǎn)作出很多調(diào)整,。HPLC的輸液泵要求輸液量恒定平穩(wěn),;進(jìn)樣系統(tǒng)要求進(jìn)樣便利切換嚴(yán)密;由于液體流動(dòng)相粘度遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于氣體,,為了減低柱壓高效液相色譜的色譜柱一般比較粗,,長(zhǎng)度也遠(yuǎn)小于氣相色譜柱。HPLC應(yīng)用非常廣泛,,幾乎遍及定量定性分析的各個(gè)領(lǐng)域,。
使用高效液相色譜時(shí),液體待檢測(cè)物被注入色譜柱,,通過(guò)壓力在固定相中移動(dòng),,由于被測(cè)物種不同物質(zhì)與固定相的相互作用不同,不同的物質(zhì)順序離開(kāi)色譜柱,,通過(guò)檢測(cè)器得到不同的峰信號(hào),,后通過(guò)分析比對(duì)這些信號(hào)來(lái)判斷待測(cè)物所含有的物質(zhì)。