色譜法zui早是由俄國(guó)植物學(xué)家茨維特（Tswett）在1906年研究用碳酸鈣分離植物色素時(shí)發(fā)現(xiàn)的,，色譜法(Chromatography)因之得名,。液相色譜法(High performance Liquid Chromatography,，HPLC)是在經(jīng)典液相色譜法的基礎(chǔ)上,，于60年代后期引入了氣相色譜理論而迅速發(fā)展起來(lái)的,。它與經(jīng)典液相色譜法的區(qū)別是填料顆粒小而均勻,，小顆粒具有高柱效,，但會(huì)引起高阻力,，需用高壓輸送流動(dòng)相，故又稱(chēng)高壓液相色譜法(High Pressure Liquid Chromatography,，HPLC),。又因分析速度快而稱(chēng)為高速液相色譜法。

高速液相色譜法按分離機(jī)制的不同分為液固吸附色譜法,、液液分配色譜法（正相與反相）,、離子交換色譜法、離子對(duì)色譜法及分子排阻色譜法,。

A .液固色譜法　      

使用固體吸附劑,，被分離組分在色譜柱上分離原理是根據(jù)固定相對(duì)組分吸附力大小不同而分離。分離過(guò)程是一個(gè)吸附—解吸附的平衡過(guò)程,。常用的吸附劑為硅膠或氧化鋁,，粒度5~10µm。適用于分離分子量200~1000的組分,，大多數(shù)用于非離子型化合物,，離子型化合物易產(chǎn)生拖尾。常用于分離同分異構(gòu)體,。
 

B .液液色譜法　       

液液色譜法按固定相和流動(dòng)相的極性不同可分為正相色譜法(NPC)和反相色譜法(RPC),。

正相色譜法 ——— 采用極性固定相(如聚乙二醇、氨基與腈基鍵合相),；流動(dòng)相為相對(duì)非極性的疏水性溶劑(烷烴類(lèi)如正已烷,、環(huán)已烷），常加入乙醇,、異丙醇,、四氫呋喃、三氯甲烷等以調(diào)節(jié)組分的保留時(shí)間,。常用于分離中等極性和極性較強(qiáng)的化合物(如酚類(lèi),、胺類(lèi)、羰基類(lèi)及氨基酸類(lèi)等）,。        

反相色譜法 ——— 一般用非極性固定相（如C18,、C8）,；流動(dòng)相為水或緩沖液，常加入甲醇,、乙腈,、異丙醇、丙酮,、四氫呋喃等與水互溶的有機(jī)溶劑以調(diào)節(jié)保留時(shí)間,。適用于分離非極性和極性較弱的化合物。RPC在現(xiàn)代液相色譜中應(yīng)用,，據(jù)統(tǒng)計(jì),，它占整個(gè)HPLC應(yīng)用的80%左右。

C .離子交換色譜法　     

固定相是離子交換樹(shù)脂,，常用苯乙烯與二乙烯交聯(lián)形成的聚合物骨架，在表面未端芳環(huán)上接上羧基,、磺酸基（稱(chēng)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂）或季氨基（陰離子交換樹(shù)脂）,。被分離組分在色譜柱上分離原理是樹(shù)脂上可電離離子與流動(dòng)相中具有相同電荷的離子及被測(cè)組分的離子進(jìn)行可逆交換，根據(jù)各離子與離子交換基團(tuán)具有不同的電荷吸引力而分離,。      

緩沖液常用作離子交換色譜的流動(dòng)相,。被分離組分在離子交換柱中的保留時(shí)間除跟組分離子與樹(shù)脂上的離子交換基團(tuán)作用強(qiáng)弱有關(guān)外，它還受流動(dòng)相的pH值和離子強(qiáng)度影響,。pH值可改變化合物的解離程度,，進(jìn)而影響其與固定相的作用，流動(dòng)相的鹽濃度大,，則離子強(qiáng)度高,，不利于樣品的解離，導(dǎo)致樣品較快流出,。         

離子交換色譜法主要用于分析有機(jī)酸,、氨基酸、多肽及核酸,。

D .離子對(duì)色譜法　      

又稱(chēng)偶離子色譜法,，是液液色譜法的分支。它是根據(jù)被測(cè)組分離子與離子對(duì)試劑離子形成中性的離子對(duì)化合物后,，在非極性固定相中溶解度增大,，從而使其分離效果改善。主要用于分析離子強(qiáng)度大的酸堿物質(zhì),。 分析堿性物質(zhì)常用的離子對(duì)試劑為烷基磺酸鹽,，如戊烷磺酸鈉、辛烷磺酸鈉等,。另外高氯酸,、三氟乙酸也可與多種堿性樣品形成很強(qiáng)的離子對(duì),。分析酸性物質(zhì)常用四丁基季銨鹽，如四丁基溴化銨,、四丁基銨磷酸鹽,。      

 離子對(duì)色譜法常用短鏈反相色譜柱柱（即C8），流動(dòng)相為甲醇-水或乙腈-水,，水中加入3~10mmol/L的離子對(duì)試劑,，在一定的pH值范圍內(nèi)進(jìn)行分離。被測(cè)組分保時(shí)間與離子對(duì)性質(zhì),、濃度,、流動(dòng)相組成及其pH值、離子強(qiáng)度有關(guān),。

E  . 排阻色譜法

固定相是有一定孔徑的多孔性填料,，流動(dòng)相是可以溶解樣品的溶劑。小分子量的化合物可以進(jìn)入孔中,，滯留時(shí)間長(zhǎng),；大分子量的化合物不能進(jìn)入孔中，直接隨流動(dòng)相流出,，它利用分子篩對(duì)分子量大小不同的各組分排阻能力的差異而完成分離,。常用于分離高分子化合物，如組織提取物,、多肽,、蛋白質(zhì)、核酸等,。