液相色譜儀作為一種分離技術(shù)和方法,，目前已經(jīng)發(fā)展到一個全新的階段。高精度的輸液泵,，應(yīng)用廣泛的色譜分離柱,，低噪音、高靈敏度的各種檢測器和功能強(qiáng)大的數(shù)據(jù)處理軟件系統(tǒng)的出現(xiàn),，都推動了液相色譜技術(shù)的迅猛發(fā)展,。液相色譜儀正以它分辨率高、分析速度快和應(yīng)用廣泛的優(yōu)點倍受儀器分析工作者的青睞,，廣泛地應(yīng)用于醫(yī)藥衛(wèi)生,、環(huán)境監(jiān)測、食品檢測等領(lǐng)域,。

應(yīng)用HPLC技術(shù)在血藥濃度,、生物胺、核苷酸,、蛋白質(zhì)濃度測定等實際工作中,，積累了許多的方法和經(jīng)驗,，在這里與大家交流，希望能對同行們有所幫助和借鑒,，共同促進(jìn)液相色譜分析技術(shù)的發(fā)展,。

液相色譜儀使用過程中常見問題分析 

（一）柱壓問題 

柱壓過高，導(dǎo)致這種情況的直接原因可能是色譜分離柱或進(jìn)樣器流動不暢通,。出現(xiàn)這種情況的根本原因可能是流動相抽濾不干凈,，存有雜質(zhì)，從而堆積在色譜柱或過濾器中,，這時只要重新配置一遍流動相,。解決“堵”的方法就是檢查色譜分離柱，確定其流動是否暢通,，具體操作是在泵工作的情況下將色譜柱的出口處擰開,，看看是否有流動相流出，同時可以調(diào)節(jié)流速,，觀察流動相流出的流量,，進(jìn)而判斷色譜柱是否堵了。還有一些原因,，比如：流動相的流速過大（一般為1.0ml/min）,、流動相的成分不符合標(biāo)準(zhǔn)（沒有使用HPLC級別的試劑或者沒有超聲*）等。這些按照藥典調(diào)整成正確的設(shè)置即可,。如果懷疑是在線過濾器堵了可以關(guān)閉排液閥,，斷開出口管路，設(shè)定流速為1ml/min,，如壓力>3kgf/cm2,，則可能堵塞，可以考慮將其置于5%稀硝酸,，超聲波清洗一段時間,。zui后在檢測驗樣品的時候加一個保護(hù)柱。有時候也會柱壓過低,，發(fā)生這個原因主要是連接不牢固,，導(dǎo)致漏液，擰緊即可,。更換流動相時沒有進(jìn)行脫氣,，導(dǎo)致儀器里面進(jìn)入空氣，一般的解決方法就是卸下超聲清洗,，然后進(jìn)行脫氣,。 

（二）基線漂移 

在色譜儀啟動之前，通常先啟動半個小時后再進(jìn)行操作,，這樣做是避免基線漂移,。出現(xiàn)這種現(xiàn)象的原因很多,，其一是色譜柱溫差變化大，需要控制柱溫,，用色譜純,，也可多抽濾幾次，除去醇溶性流動相外的其他流動相要勤更換,，做到現(xiàn)配現(xiàn)用，以免滋生微生物,，堵塞進(jìn)樣通道,，造成基線不穩(wěn)定，影響出峰,。第三個原因是流路本身長期進(jìn)樣沒有時間保養(yǎng)積淀的雜質(zhì),。解決方法是用洗脫劑沖洗樣品流動的通道，對于反相色譜系統(tǒng)的流動相甲醇-水系統(tǒng),，按照梯度洗脫的方法沖洗掉系統(tǒng)和色譜柱中的雜質(zhì),，以免影響樣品的質(zhì)量。必要時可以用異丙醇,。第四個可能性就是由于紫外燈的使用壽命到了,，不能再繼續(xù)工作，解決方法是換紫外燈,。zui后是樣品本身性質(zhì)的影響,，對于流動相的影響較大，解決方法就是用保護(hù)柱檢測樣品,，以免出現(xiàn)問題,。