液相色譜儀作為一種分離技術(shù)和方法,，目前已經(jīng)發(fā)展到一個(gè)全新的階段,。高精度的輸液泵，應(yīng)用廣泛的色譜分離柱,，低噪音,、高靈敏度的各種檢測器和功能強(qiáng)大的數(shù)據(jù)處理軟件系統(tǒng)的出現(xiàn)，都推動(dòng)了液相色譜技術(shù)的迅猛發(fā)展,。液相色譜儀正以它分辨率高,、分析速度快和應(yīng)用廣泛的優(yōu)點(diǎn)倍受儀器分析工作者的青睞，廣泛地應(yīng)用于醫(yī)藥衛(wèi)生,、環(huán)境監(jiān)測,、食品檢測等領(lǐng)域。

應(yīng)用HPLC技術(shù)在血藥濃度,、生物胺,、核苷酸,、蛋白質(zhì)濃度測定等實(shí)際工作中，積累了許多的方法和經(jīng)驗(yàn),，在這里與大家交流,，希望能對(duì)同行們有所幫助和借鑒，共同促進(jìn)液相色譜分析技術(shù)的發(fā)展,。

液相色譜儀使用過程中常見問題分析 

（一）柱壓問題 

柱壓過高,，導(dǎo)致這種情況的直接原因可能是色譜分離柱或進(jìn)樣器流動(dòng)不暢通。出現(xiàn)這種情況的根本原因可能是流動(dòng)相抽濾不干凈,，存有雜質(zhì),，從而堆積在色譜柱或過濾器中，這時(shí)只要重新配置一遍流動(dòng)相,。解決“堵”的方法就是檢查色譜分離柱，確定其流動(dòng)是否暢通,，具體操作是在泵工作的情況下將色譜柱的出口處擰開,，看看是否有流動(dòng)相流出，同時(shí)可以調(diào)節(jié)流速,，觀察流動(dòng)相流出的流量,，進(jìn)而判斷色譜柱是否堵了。還有一些原因,，比如：流動(dòng)相的流速過大（一般為1.0ml/min）,、流動(dòng)相的成分不符合標(biāo)準(zhǔn)（沒有使用HPLC級(jí)別的試劑或者沒有超聲*）等。這些按照藥典調(diào)整成正確的設(shè)置即可,。如果懷疑是在線過濾器堵了可以關(guān)閉排液閥,，斷開出口管路，設(shè)定流速為1ml/min,，如壓力>3kgf/cm2,，則可能堵塞，可以考慮將其置于5%稀硝酸,，超聲波清洗一段時(shí)間,。zui后在檢測驗(yàn)樣品的時(shí)候加一個(gè)保護(hù)柱。有時(shí)候也會(huì)柱壓過低,，發(fā)生這個(gè)原因主要是連接不牢固,，導(dǎo)致漏液，擰緊即可,。更換流動(dòng)相時(shí)沒有進(jìn)行脫氣,，導(dǎo)致儀器里面進(jìn)入空氣，一般的解決方法就是卸下超聲清洗,，然后進(jìn)行脫氣,。 

（二）基線漂移 

在色譜儀啟動(dòng)之前,，通常先啟動(dòng)半個(gè)小時(shí)后再進(jìn)行操作，這樣做是避免基線漂移,。出現(xiàn)這種現(xiàn)象的原因很多,，其一是色譜柱溫差變化大，需要控制柱溫,，用色譜純,，也可多抽濾幾次，除去醇溶性流動(dòng)相外的其他流動(dòng)相要勤更換,，做到現(xiàn)配現(xiàn)用,，以免滋生微生物，堵塞進(jìn)樣通道,，造成基線不穩(wěn)定,，影響出峰。第三個(gè)原因是流路本身長期進(jìn)樣沒有時(shí)間保養(yǎng)積淀的雜質(zhì),。解決方法是用洗脫劑沖洗樣品流動(dòng)的通道,，對(duì)于反相色譜系統(tǒng)的流動(dòng)相甲醇-水系統(tǒng)，按照梯度洗脫的方法沖洗掉系統(tǒng)和色譜柱中的雜質(zhì),，以免影響樣品的質(zhì)量,。必要時(shí)可以用異丙醇。第四個(gè)可能性就是由于紫外燈的使用壽命到了,，不能再繼續(xù)工作,，解決方法是換紫外燈。zui后是樣品本身性質(zhì)的影響,，對(duì)于流動(dòng)相的影響較大,，解決方法就是用保護(hù)柱檢測樣品，以免出現(xiàn)問題,。