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如何看懂流式結(jié)果圖
流式結(jié)果圖有4種類型,，分別為:1. 直方圖 2.散點(diǎn)圖 3. 等高線圖 4.密度圖
下面一一為大家介紹
1. 直方圖（Histograms）
a.橫坐標(biāo)代表熒光信號(hào)或散射光信號(hào)相對(duì)強(qiáng)度，可以是線性或?qū)?shù)坐標(biāo),。
b.縱坐標(biāo)一般是相對(duì)細(xì)胞數(shù),。
直方圖適用于分析處理周期（如下圖）
直方圖分析數(shù)據(jù)注意事項(xiàng)：
① 不能比較不同標(biāo)記之間的表達(dá)量。如一號(hào)樣本單標(biāo)記CD133,、二號(hào)樣本單標(biāo)記CD44,，那么CD133與CD44表達(dá)量不能用直方圖進(jìn)行比較。
② 直方圖的形狀（直方圖的高度及寬度）取決于儀器的類型,、處理軟件和樣本
③檢測(cè)目的細(xì)胞非常少（即檢測(cè)的細(xì)胞在一個(gè)細(xì)胞群體中所占的比例特別少）,，因此需要統(tǒng)計(jì)大量的數(shù)據(jù)，直方圖將會(huì)將該稀有細(xì)胞覆蓋,，如下圖散點(diǎn)圖中的P2門為CD16陰性群體,，但在直方圖中則幾乎看不出來，所以此時(shí)散點(diǎn)圖為展示數(shù)據(jù)方式,。
2. 散點(diǎn)圖（Dot plots）
散點(diǎn)圖是雙變量圖的基本圖形,，相對(duì)于單參數(shù)直方圖其分析通量更高，同時(shí)也能更好觀察到較小比例細(xì)胞群,，參見直方圖注意事項(xiàng)2,，另外散點(diǎn)圖中設(shè)門后，可以賦予門控顏色,，便于觀察門控細(xì)胞群在其他圖中的分布,，比如下圖只賦予淋巴細(xì)胞門紅色，則可以觀察到淋巴細(xì)胞中在散射光圖中的分布。
橫坐標(biāo)和縱坐標(biāo)都是光信號(hào),，十字門左下角是雙陰性群,，右下角和左上角是單陽群，右上角是雙陽群,。散點(diǎn)圖上的每一個(gè)點(diǎn)可以代表某一個(gè)細(xì)胞的信息,。
但是散點(diǎn)圖在顯示足夠多events下的細(xì)胞分群上缺乏細(xì)節(jié)，如下圖,，流式儀器記錄的events達(dá)到50000以上時(shí),，CCR7的陽性群與陰性群已經(jīng)沒有明顯界限，但當(dāng)用等高線圖或者密度圖時(shí),，明顯改善點(diǎn)圖存在的缺點(diǎn),。
3.密度圖（Density plot）
密度圖不僅能夠表示一個(gè)標(biāo)記的表達(dá)水平，還能顯示給定區(qū)域中事件的相對(duì)數(shù)量（密度）,。有三種密度圖,。密度度、斑馬線圖,、偽彩圖,。選擇自己一種喜歡的應(yīng)用
4.等高線圖（Contour plots）
等高線圖是另一顯示數(shù)據(jù)密度的形式。該圖使用等高線顯示數(shù)據(jù)的相對(duì)強(qiáng)度,。等高線的每條線包含events的百分比由所用軟件的等高線圖決定,。單純的等高線圖不能顯示低密度的群體顆粒或者異常值,，比較好的策略為等高線圖與點(diǎn)圖結(jié)合起來使用,，比如下圖左邊為點(diǎn)圖，中間為等高線圖,，左邊為等高線加點(diǎn)圖。
分析,，建議用散點(diǎn)圖用直方圖不能說錯(cuò),，但這需要在沒有自發(fā)熒光或自發(fā)熒光低、熒光滲漏調(diào)整到位的情況下,。而在實(shí)際檢測(cè)中,，自發(fā)熒光總是難以避免，更不用說現(xiàn)在多色流式中熒光滲漏對(duì)通道的干擾,。
通過下面這個(gè)圖可以明顯看出,，在直方圖上，自發(fā)熒光造成的拖尾,，使得你的陰陽性分界位置難以確定,，即使GFP樣本能夠形成雙峰，但實(shí)際上雙峰分界位置同時(shí)包括了自發(fā)熒光假陽性信號(hào),、陽性群弱表達(dá)信號(hào),，這兩部分信號(hào)數(shù)量一樣的時(shí)候,，這個(gè)位置恰好相互抵消，但如果不一樣的,，這個(gè)比例就不準(zhǔn)確了,，如果改用下面的散點(diǎn)圖，用不規(guī)則門（如下面的梯形門）,，就可以準(zhǔn)確圈出陽性群,，呈現(xiàn)更真實(shí)的比例：
綜上，不同類型的流式圖各有優(yōu)缺點(diǎn),，適用于不同類型的檢測(cè),。