TransIT®-Lenti Transfection Reagent

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【Mirus新品*】TransIT®-Lenti Transfection Reagent——重組慢病毒生產(chǎn)的理想選擇

Mirus公司新推出轉(zhuǎn)染試劑TransIT^®-Lenti Transfection Reagent,，該產(chǎn)品適用于將載體轉(zhuǎn)染至貼壁的HEK 293T細胞中，可提高轉(zhuǎn)染效率,，增加重組慢病毒產(chǎn)量,。

產(chǎn)品特點：

高性能——高達八倍的功能性滴度

操作簡便——無需更換培養(yǎng)液基 

無動物源性成分——安全可靠

產(chǎn)品信息

相關產(chǎn)品*——TransduceIT™ Transduction Reagent

TransduceIT™ Transduction Reagent是一款陽離子聚合物試劑，可顯著提高靜止和分裂期的哺乳動物細胞中逆轉(zhuǎn)錄病毒的轉(zhuǎn)導和轉(zhuǎn)基因表達,。

產(chǎn)品信息

圖1. TransIT-Lenti轉(zhuǎn)染試劑具有高功能性滴度.分別使用TransIT-Lenti (3:1, vol:wt), Lipofectamine® 2000 (3:1), Lipofectamine® 3000 (3:1:1), 25 kDa PEI (6:1), 和CaPO4 precipitation (4 µg pDNA/well)五種試劑將MISSION®載體（pLKO.1-puro-CMV-TurboGFP™載體和慢病毒包裝試劑）轉(zhuǎn)染至貼壁293T/17細胞中,。收集上清液,，過濾（0.45 µm），用293T/17細胞滴定,。慢病毒轉(zhuǎn)導實驗使用了TransduceIT™（8 µg/ml）,，轉(zhuǎn)導72h后使用guava easyCyte™ 5HT流式細胞儀檢測GFP表達情況。功能性滴度根據(jù)病毒的稀釋液與20% GFP陽性細胞進行計算,。

圖2. 使用TransIT-Lenti實現(xiàn)高效轉(zhuǎn)染. 使用TransIT®-Lenti轉(zhuǎn)染試劑 (3:1, vol:wt)將MISSION®載體（pLKO.1-puro-CMV-TurboGFP™載體和慢病毒包裝試劑）轉(zhuǎn)染至貼壁293T/17細胞中,。轉(zhuǎn)染48h后檢測GFP效率,。圖片于轉(zhuǎn)染48h后拍自熒光顯微鏡。鏡下細胞變圓和細胞融合是由于假型化重組慢病毒的VSV-G 蛋白的高表達,。

重組慢病毒顆粒和靶細胞感染概述

（1） 將包括編碼目的基因,、水泡性口炎G蛋白（VSV-G）和必需的病毒蛋白（例如gag,，pol和rev）的3-4種質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至生產(chǎn)細胞（例如293T）中。

（2） 病毒從生產(chǎn)細胞漿膜以出芽的方式組裝及釋放到上清液中,，并以VSV-G的囊膜蛋白包裹,。將含有病毒的培養(yǎng)液用0.45微米的濾器進行過濾以除去細胞。

（3） 重組慢病毒顆粒轉(zhuǎn)導靶細胞常用陽離子聚合物來增加聚合和攝取,。病毒進入細胞后脫衣殼,，將RNA基因組和病毒的酶暴露出來。病毒RNA被逆轉(zhuǎn)錄成DNA,，然后整合到宿主基因組中,。

（4） 轉(zhuǎn)錄和翻譯后由細胞產(chǎn)生目的基因所編碼的蛋白質(zhì)。

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