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InvivoGen的CpG ODNs 優(yōu)勢

· 涵蓋zui全的CpG寡聚脫氧核苷酸 （CpG ODN）或細(xì)菌DNA

· 生物學(xué)活性檢測

· 隨產(chǎn)品提供去內(nèi)毒素水

· 高溶解度

CpG ODNs 是合成的單鏈DNA短片段,，含有特定的非甲基化CpG二核苷酸序列。CpG ODNs含有部分或全部磷硫酰骨架（phosphorothioated (PS) backbone）,。與細(xì)菌基因組DNA的磷酸二酯骨架相對（phosphodiester (PO) backbone）,。

三個主要刺激性CpG ODNs的分類，是基于其結(jié)構(gòu)特性與在人外周血單核細(xì)胞（PBMC）,，某些B細(xì)胞和 類漿樹突細(xì)胞（pDC）的活性而劃分,。三類CpG ODNs是Class A (Type D), Class B (Type K) 和Class C,。

Classes of CpG ODNs

- CpG-A ODNs 以含有CpG回文序列為中西的PO骨架和PS修飾的3’端poly-G鏈構(gòu)成。CpG-A ODNs刺激類漿樹突細(xì)胞（pDC）可以較強的產(chǎn)生IFN-a,，但是會較弱的激活TLR9依賴的NF-kB信號通路,，產(chǎn)生較少的促炎性細(xì)胞因子（如白細(xì)胞介素6）。

- CpG-B ODNs 是包含一個或多個CpG二核苷酸的完整PS骨架結(jié)構(gòu)序列,。CpG-B ODNs可以較強的活化B細(xì)胞和TLR9介導(dǎo)的NF-kB信號,，但刺激分泌IFN-a的效果較弱。

- CpG-C ODNs 結(jié)構(gòu)是Class A和B的混合體,。它包含了完整的PS骨架和CpG回文序列,。CpG-C ODNs可以較強的引起pDC分泌IFN-a，在刺激B細(xì)胞時也可以得到較好的效果,。

Class A

Class A (type D) CpG ODNs (CpG-A ODNs) 以含有CpG回文序列為中西的PO骨架和PS修飾的3’端poly-G鏈構(gòu)成。

Poly G 末端在分子間形成四分體,，從而產(chǎn)生高分子量結(jié)構(gòu),。這樣的結(jié)構(gòu)增強了穩(wěn)定性與內(nèi)涵體的胞內(nèi)轉(zhuǎn)運，促使大量IFN-a的產(chǎn)生和pDCs的成熟,。

CpG-A ODNs也是NK細(xì)胞的強活化劑,，其作用是通過間接的細(xì)胞因子信號來達(dá)到活化效果。

Ballas ZK. et al., 1996. Induction of NK activity in murine and human cells by CpG motifs in oligodeoxynucleotides and bacterial DNA. J Immunol. 157(5):1840-5. Krug A. et al., 2001. Identification of CpG oligonucleotide sequences with high induction of IFN-alpha/beta in plasmacytoid dendritic cells. Eur J Immunol. 31(7):2154-63. Verthelyi D. et al., 2001. Human peripheral blood cells differentially recognize and respond to two distinct CPG  motifs. J Immunol. 166(4):2372-7.

Class A CpG ODNs 刺激 HEK-Blue™ hTLR9 細(xì)胞 （貨號：hkb-htlr9）

用不同濃度的A-class CpG ODNs, ODN 1585, ODN 2216 或 ODN 2236及相應(yīng)的對照ODNs 刺激HEK-Blue™ hTLR9 細(xì)胞 （表達(dá)人源TLR9和NF-κB誘導(dǎo) SEAP 報告基因, 刺激物與HEK-Blue Detection試劑共孵育24 小時, NF-ΚB-誘導(dǎo) SEAP的水平在OD 655 nm檢測,。

Class A CpG ODNs 刺激 HEK-Blue™ mTLR9 細(xì)胞 （貨號：mkb-htlr9）

用不同濃度的A-class CpG ODNs, ODN 1585, ODN 2216 或 ODN 2236及相應(yīng)的對照ODNs 刺激HEK-Blue™ mTLR9 細(xì)胞 （表達(dá)鼠源TLR9和NF-κB誘導(dǎo) SEAP 報告基因, 刺激物與HEK-Blue Detection試劑共孵育24 小時, NF-ΚB-誘導(dǎo) SEAP的水平在OD 655 nm檢測,。

Class B

Class B (type K) CpG ODNs (CpG-B ODNs)是18-28摩爾的線性脫氧寡核苷酸。CpG-B ODNs 是包含一個或多個6摩爾CpG二核苷酸的完整PS骨架結(jié)構(gòu)序列,。人源的*序列是GTCGTT[1],，鼠源的*序列是GACGTT[2]。

CpG-B ODNs是B細(xì)胞和NK細(xì)胞的強刺激劑,，對于IFN-a分泌的刺激效果卻較弱[3,4],。CpG-B ODNs表現(xiàn)出較好的抗腫瘤效果以及Th1型佐劑的活性。

 Hartmann G & Krieg AM., 2000. Mechanism and function of a newly identified CpG DNA motif in human primary B cells. J Immunol. 164(2):944-53. 2- Krieg AM. et al., 1995. CpG motifs in bacterial DNA trigger direct B-cell activation. Nature. 374(6522):546-9. 3- Hartmann G. et al., 2000. Delineation of a CpG phosphorothioate oligodeoxynucleotide for activating primate immune responses in vitro and in vivo. J Immunol. 164(3):1617-24. 4- Gürsel M. et al., 2002. Differential and competitive activation of human immune cells by distinct classes of CpG oligodeoxynucleotide. J Leukoc Biol. 71(5):813-20.

Class B CpG ODNs 刺激 HEK-Blue™ hTLR9 細(xì)胞 （貨號：hkb-htlr9）

用不同濃度的B-class CpG ODNs, ODN 1668, ODN 1826, ODN 2006 或 ODN 2007及相應(yīng)的對照ODNs 刺激HEK-Blue™ hTLR9 細(xì)胞 （表達(dá)人源TLR9和NF-κB誘導(dǎo) SEAP 報告基因, 刺激物與HEK-Blue Detection試劑共孵育24 小時, NF-ΚB-誘導(dǎo) SEAP的水平在OD 655 nm檢測,。

Class B CpG ODNs 刺激 HEK-Blue™ mTLR9 細(xì)胞 （貨號：mkb-htlr9）

用不同濃度的B-class CpG ODNs, ODN 1668, ODN 1826, ODN 2006 或 ODN 2007及相應(yīng)的對照ODNs 刺激HEK-Blue™ mTLR9 細(xì)胞 （表達(dá)鼠源TLR9和NF-κB誘導(dǎo) SEAP 報告基因, 刺激物與HEK-Blue Detection試劑共孵育24 小時, NF-ΚB-誘導(dǎo) SEAP的水平在OD 655 nm檢測,。

Class C

Class C CpG ODNs (CpG-C ODNs)結(jié)構(gòu)是Class A和B的混合體。它包含了完整的PS骨架和CpG回文序列,。

C-Class CpG ODNs可以較強的引起pDC分泌IFN-a,，在刺激B細(xì)胞時也可以得到較好的效果。C-Class CpG ODNs是很強的Th1-誘導(dǎo)性佐劑,。

Vollmer J. et al., 2004. Characterization of three CpG oligodeoxynucleotide classes with distinct immunostimulatory activities. Eur J Immunol. 34(1):251-62.

Class C CpG ODNs 刺激 HEK-Blue™ hTLR9 細(xì)胞 （貨號：hkb-htlr9）

用不同濃度的C-class CpG ODNs, ODN 2395 或 ODN M362及相應(yīng)的對照ODNs 刺激HEK-Blue™ hTLR9 細(xì)胞 （表達(dá)人源TLR9和NF-κB誘導(dǎo) SEAP 報告基因, 刺激物與HEK-Blue Detection試劑共孵育24 小時, NF-ΚB-誘導(dǎo) SEAP的水平在OD 655 nm檢測,。

Class C CpG ODNs 刺激 HEK-Blue™ mTLR9 細(xì)胞 （貨號：mkb-htlr9）

用不同濃度的C-class CpG ODNs, ODN 2395 或 ODN M362及相應(yīng)的對照ODNs 刺激HEK-Blue™ mTLR9 細(xì)胞 （表達(dá)鼠源TLR9和NF-κB誘導(dǎo) SEAP 報告基因, 刺激物與HEK-Blue Detection試劑共孵育24 小時, NF-ΚB-誘導(dǎo) SEAP的水平在OD 655 nm檢測。

正確選擇ODN類型

ODN的品質(zhì)經(jīng)專業(yè)的實驗室檢測,，并發(fā)表文獻(xiàn)

綠字部分：實驗結(jié)果表明,，從InvivoGen購買的CpG-C,， 不同批次的產(chǎn)品刺激細(xì)胞并產(chǎn)生IgG的效果均一穩(wěn)定，而從Sigma 和Coley購買的產(chǎn)品活性則非常不連續(xù)