作為整個ELISA實驗的最后一步，檢測結(jié)果的計算對于整個實驗十分重要,。欣博盛生物為您整理了ELISA數(shù)據(jù)處理相關(guān)的知識,，希望對您的科研有所幫助！

ELISA結(jié)果處理流程

以夾心法ELISA的數(shù)據(jù)處理為例：

1. ELISA的樣本通常要設(shè)置復(fù)孔進(jìn)行檢測,，這樣才能為結(jié)果的統(tǒng)計驗證提供足夠的數(shù)據(jù),。分別計算標(biāo)準(zhǔn)品、實驗組樣本的吸光度的平均值,。復(fù)孔檢測結(jié)果的變異系數(shù)（CV）不應(yīng)超出20%,。

2. 建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo),、OD值作縱坐標(biāo),，擬合曲線。（各類ELISA處理軟件與Excel均可提供曲線擬合選項,。）下圖展示了一條具有代表性的標(biāo)準(zhǔn)曲線,，數(shù)據(jù)來自QuantiCyto® Human MIF ELISA kit(EHC086).

注：本圖僅供參考，應(yīng)以同次試驗標(biāo)準(zhǔn)品所繪標(biāo)準(zhǔn)曲線計算標(biāo)本中人MIF的含量,。

3. 根據(jù)擬合的標(biāo)準(zhǔn)曲線,，通過待測樣品的OD值計算出樣本的濃度。若樣品經(jīng)過稀釋,，須乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù),。

4. 對于OD值落在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍外的樣品，為獲得準(zhǔn)確的結(jié)果,，需排查可能存在的問題,。

ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合方法

選擇正確的曲線擬合方法對于獲取準(zhǔn)確的ELISA實驗結(jié)果至關(guān)重要,。面對眾多的擬合選項,，研究人員需要根據(jù)實驗的具體情況和標(biāo)準(zhǔn)曲線的特性來挑選最合適的模型,。

以下為幾種常見的ELISA擬合方式：

1. 線性回歸

線性回歸適用于分析在較小濃度范圍內(nèi)數(shù)據(jù)點(diǎn)與濃度之間呈現(xiàn)線性關(guān)系的實驗數(shù)據(jù)。它通過最小二乘法找到最佳擬合直線,。在酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）數(shù)據(jù)分析中,，當(dāng)實驗數(shù)據(jù)的線性關(guān)系非常顯著時，線性回歸通常能夠提供較高的R2值,，R2值是衡量模型擬合優(yōu)度的一個指標(biāo),，其值越接近1，表示模型擬合效果越好,。如果數(shù)據(jù)的線性擬合效果不佳,，可能需要考慮使用其他類型的曲線擬合方法，例如二次曲線或logistic曲線（四參數(shù)模型）,，這些方法適用于數(shù)據(jù)點(diǎn)與濃度之間存在非線性關(guān)系的場合,。

Linear Fit:：

2. 二次多項式回歸

在ELISA數(shù)據(jù)處理中，二次多項式回歸是處理非線性數(shù)據(jù)的有效方法,，特別適用于那些在特定濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)輕微彎曲的標(biāo)準(zhǔn)曲線,。在許多ELISA實驗中，標(biāo)準(zhǔn)曲線的擬合近似于二次多項式的升段或者降段,。因此,，使用二次多項式回歸時，應(yīng)確保所選的取值范圍能夠準(zhǔn)確地反映這些曲線段的特性,。

Quadratic Fit:  

3. 四參數(shù)對數(shù)曲線擬合

四參數(shù)對數(shù)曲線擬合適用于大多數(shù)ELISA實驗,，能夠很好地描述S形標(biāo)準(zhǔn)曲線。它要求X值不能小于0（因為指數(shù)函數(shù)的底數(shù)必須是正實數(shù)）,。四參數(shù)對數(shù)曲線擬合在很多情況下都能很好地擬合ELISA的反應(yīng)曲線,，這使得它成為ELISA數(shù)據(jù)分析中應(yīng)用最-廣的模型之一。

Logistic Model: 

ELISA 數(shù)據(jù)處理軟件使用（ELISA Calc為例）

ELISA Calc是一款專門用于處理ELISA數(shù)據(jù)的軟件,。它支持多種回歸和擬合模型,，如直線回歸、二次曲線回歸以及Logistic曲線擬合等 ,。您可以通過輸入標(biāo)準(zhǔn)品的濃度和對應(yīng)的吸光度來繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,，并據(jù)此計算樣品的濃度。欣博盛生物在此給各位老師展示使用ELISA Calc軟件的完整步驟：

1. 獲取實驗數(shù)據(jù)與數(shù)據(jù)的初步處理（此處僅包含標(biāo)曲數(shù)據(jù)）：

本次實驗做復(fù)孔,，如實驗作復(fù)孔,、三孔，需要先進(jìn)行平均值計算（如表中標(biāo)紅部分）,。

注：本次實驗中所用試劑盒為QuantiCyto® Mouse TNF-α ELISA kit(EMC102a),，試劑盒具體參數(shù)信息如下：

2. 軟件下載

此處數(shù)據(jù)處理軟件為ELISA Calc，可在網(wǎng)絡(luò)上自行免費(fèi)下載。

3. 輸入OD值與標(biāo)準(zhǔn)品濃度

（1）打開ELISA Calc軟件后,，界面如下所示：

（2）在表格區(qū)域依次輸入或點(diǎn)擊左下方“粘貼(P)"直接粘貼標(biāo)準(zhǔn)曲線的數(shù)據(jù),。在X(濃度/劑量)這一列表格中輸入標(biāo)準(zhǔn)品濃度，在Y（反應(yīng)值）列依次輸入X列濃度所對應(yīng)的OD值,；

4. 選擇擬合曲線的類型并進(jìn)行計算

（1）線性回歸

Linear Fit:：

以線性回歸為例,，點(diǎn)擊左上角“回歸、擬合模型(M)"選擇“直線回歸",，選擇是否扣除本底,，完成后點(diǎn)擊 “回歸、擬合(R)"按鈕,，自動生成擬合曲線,。

點(diǎn)擊后，ELISA Calc展示界面如下：

（2）二次多項式回歸

Quadratic Fit:  

點(diǎn)擊左上角“回歸,、擬合模型(M)"選擇“二次曲線回歸",，選擇是否扣除本底，完成設(shè)置后點(diǎn)擊 “回歸,、擬合(R)"按鈕,，自動生成擬合曲線。

（3）四參數(shù)對數(shù)曲線擬合

Logistic Model: 

點(diǎn)擊左上角“回歸,、擬合模型(M)"選擇“l(fā)ogistic曲線擬合2（四參數(shù)）",，選擇是否扣除本底，完成設(shè)置后點(diǎn)擊 “回歸,、擬合(R)"按鈕,，自動生成擬合曲線。

5. 查看標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合后的信息

點(diǎn)擊“回歸方程(R)"按鈕后,，您將查看到右側(cè)展示的回歸分析結(jié)果,。在這些結(jié)果中，R2值用于衡量模型對數(shù)據(jù)的擬合程度,。理想情況下,，R2值越接近1，表示模型對數(shù)據(jù)的解釋能力越強(qiáng),，擬合效果越好,。如果觀察到R2值沒有達(dá)到預(yù)期的理想水平，這可能意味著當(dāng)前的回歸模型沒有很好地捕捉到數(shù)據(jù)之間的關(guān)系,，或者數(shù)據(jù)本身存在較大的變異性,，可以通過檢查數(shù)據(jù)是否輸入有誤、去除異常數(shù)值,、選擇其他擬合方式等方法進(jìn)行排查或修正,。

6. 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣本濃度

點(diǎn)擊“由Y計算X",，在“Y值"框內(nèi)輸入實驗所得OD值，點(diǎn)擊“計算",，即可計算出對應(yīng)的X值（濃度值）,；當(dāng)然，ELISA Calc支持批量計算,，可從Eecel或者word文檔中拷貝一批Y值（OD值）,，點(diǎn)擊左下角的“粘貼"按鈕進(jìn)行批量計算。軟件會自動處理這些數(shù)據(jù),，并在輸出區(qū)域展示每個OD值對應(yīng)的濃度。

以上為ELISA 數(shù)據(jù)處理軟件使用（ELISA Calc為例）的流程簡介,，該軟件操作簡單,，極易上手，可以結(jié)合excel表格處理數(shù)據(jù),，在計算大批量數(shù)據(jù)時表現(xiàn)出明顯的優(yōu)勢,。

關(guān)于欣博盛生物：

欣博盛生物科技有限公司成立于2007年，是一家力耕于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域的高新技術(shù)企業(yè),，專門從事以ELISA產(chǎn)品為主的生物試劑研發(fā)與銷售,，致力于為廣大研究人員提供高品質(zhì)的科研產(chǎn)品。

欣博盛研發(fā)生產(chǎn)中心擁有完整的酶聯(lián)免疫檢測試劑盒研發(fā)和生產(chǎn)平臺,，研發(fā)生產(chǎn)團(tuán)隊由具有近30年免疫檢測行業(yè)經(jīng)驗的專家?guī)ьI(lǐng),，由具有生物學(xué)、醫(yī)學(xué),、藥學(xué),、檢驗學(xué)等相關(guān)專業(yè)和研發(fā)經(jīng)驗的人員組成。廣泛與歐美知-名的抗原抗體生產(chǎn)公司和機(jī)構(gòu)開展合作,，篩選和委托定制高質(zhì)量的原料,，采用行業(yè)內(nèi)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)來研發(fā)生產(chǎn)ELISA試劑盒。公司自主研發(fā)的ELISA試劑盒在國內(nèi)眾多重點(diǎn)實驗室廣泛使用,，深受廣大科研人員的好評,。欣博盛品牌 ELISA試劑盒自推出以來已先后在Nature, Cell, PNAS等國際期刊中被引用。

欣博盛生物現(xiàn)可提供三百余種不同指標(biāo)ELISA試劑盒,，涵蓋各類常用指標(biāo),，更可提供ELISA定制與代測服務(wù)。更多詳情,，歡迎咨詢欣博盛生物,！