內(nèi)毒素污染

內(nèi)毒素,，又稱脂多糖（LPS），是革蘭氏陰性細(xì)菌的主要細(xì)胞壁成份,。內(nèi)毒素的來源包括培養(yǎng)基,、血清、水,、緩沖溶液和其他細(xì)胞培養(yǎng)試劑,，如胰蛋白酶。內(nèi)毒素是體內(nèi)外炎癥反應(yīng)的有效誘導(dǎo)劑,。內(nèi)毒素污染是細(xì)胞培養(yǎng)和生產(chǎn)注射藥物中的主要問題,。溶液和試劑可能是無菌但仍含有細(xì)菌成分，因此監(jiān)測細(xì)胞培養(yǎng)試劑中是否存在內(nèi)毒素至關(guān)重要,。

注意：“內(nèi)毒素"有時候用于描述細(xì)菌其他組成部分（如鞭毛蛋白）,，但在細(xì)菌學(xué)中它僅指脂多糖。

LPS的基本結(jié)構(gòu)

常見的內(nèi)毒素污染源,？

水 — 使用高純度水制備培養(yǎng)基和溶液,，清潔玻璃器皿。

玻璃器皿 — 為了消除內(nèi)毒素,，必須將玻璃器皿加熱至250°C維持≥30分鐘,，或加熱到180°C維持 3 小時1。

培養(yǎng)液,、血清和添加劑 — 使用前要求制造商提供內(nèi)毒素水平認(rèn)證或測試,。

塑料容器 — 要求制造商提供內(nèi)毒素水平和無致熱源的證明。

讓 InvivoGen 保障您的安全 ,！所有InvivoGen的試劑都經(jīng)過徹-底測試,，以確保不存在細(xì)菌污染，包括內(nèi)毒素,。

我的實驗有什么風(fēng)險,？

內(nèi)毒素在體外和體內(nèi)實驗均可引起顯著的不穩(wěn)定性。脂質(zhì)A部分能夠激活細(xì)胞表面或內(nèi)體的Toll樣受體4（TLR4）,，誘導(dǎo)MAP激酶（MAPK）,、NF-κB和IRF（干擾素調(diào)節(jié)因子）通路的激活。盡管內(nèi)毒素的作用隨濃度和細(xì)胞類型的不同而改變,，但它們確實可以改變細(xì)胞形態(tài),、影響增殖和轉(zhuǎn)染效率,。此外,，LPS還誘導(dǎo)了炎性細(xì)胞因子如TNF-α,、IL-1β、IL-6,、IL-8和IL-18的產(chǎn)生,，并激活caspase 4/5/11-NLRP3 非經(jīng)典炎癥小體，導(dǎo)致細(xì)胞焦亡,。

在體內(nèi)實驗,，低內(nèi)毒素濃度可刺激免疫系統(tǒng)，而高濃度可引起發(fā)燒,、低血壓,、多器官衰竭，甚至死亡,。

內(nèi)毒素在體內(nèi)外的主要影響

1.?Gorbet MB. & Sefton MV., 2005., 2.?Leider, R. et al. 2013., 3.?Nims, RW. & Price PJ. 2017., 4.?Rathinam VAK. et al., 2019

生物試劑內(nèi)毒素檢測

HEK-Blue™ LPS 檢測試劑盒 2

基于細(xì)胞的比色法分析

• 用途廣泛：適用于幾乎所有的生物試劑

• 高靈敏度：檢測限為0.01 EU/ml

• 經(jīng)濟實惠：1個試劑盒最多可進行500次測試

HEK-Blue™ LPS 檢測試劑盒2的原理

試劑盒依賴于InvivoGen專有的HEK-Blue™-4細(xì)胞,，該細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)人源TLR4和一個NF-κB誘導(dǎo)的分泌型胚胎堿性磷酸酶（SEAP）報告基因。

簡單的實驗程序使該試劑盒成為常規(guī)測試的理想選擇,。只要樣品中含有微量的LPS,，在與HEK-Blue™-4細(xì)胞孵育過夜后，會導(dǎo)致NF-κB的激活和SEAP報告基因的表達(dá),。培養(yǎng)上清液中的SEAP活性通過加上底物QUANTI-Blue™溶液,，并使用分光光度計在620-655 nm的波長測量。吸光度與內(nèi)毒素含量成正比,。使用試劑盒中提供的HEK-Blue™內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品,，經(jīng)系列稀釋獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線從而計算內(nèi)毒素濃度（大腸桿菌055:B5 LPS的制備參照FDA批準(zhǔn)的內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品（CSE）制備標(biāo)準(zhǔn)）。HEK-Blue™ LPS檢測試劑盒2 在InvivoGen公司內(nèi)部用作常規(guī)檢測,。

使用該試劑盒的5大原因

1.替代昂貴而耗時的鱟試劑（LAL）,。

購買此套件一次，凍存HEK-Blue™-4細(xì)胞,，以后只需重新訂購其他耗材,。

2.與LAL分析不同，如果樣品含有(1,3)-β-D-葡聚糖,，使用HEK-Blue™-4細(xì)胞進行LPS檢測不會導(dǎo)致假陽性,。

3.適用于所有生物樣品，包括培養(yǎng)基,、血清,、化學(xué)制劑和疫苗佐劑。

4.溶液顏色從粉紅色變?yōu)樽?藍(lán)色表示 陽性反應(yīng),，結(jié)果簡單可視,。

5.包括一本實驗程序小冊子,，計算內(nèi)毒素濃度的方法，以及疑難排解部分,。

產(chǎn)品訂購

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