Funakoshi品牌（國內授權代理商欣博盛生物）的FAOBlue是一款可通過熒光成像將活細胞內脂肪酸β-氧化（FAO）活性可視化的試劑,。只需將產品添加到培養(yǎng)基中，即可通過熒光觀察定量脂肪酸β-氧化活性,。

FAO（脂肪酸β-氧化,，Fatty acid beta-oxidation）

脂肪酸（FA）是多種脂質的基本成分，是細胞的重要組成部分,，同時也是能量的主要來源之一,。FA降解的主要途徑是通過線粒體脂肪酸β-氧化（FAO）。FAO 是肝臟,、心臟和骨骼肌等器官能量平衡的關鍵代謝途徑,。

FAO是一個復雜的生化過程，涉及多種酶的參與,。FAO主要分為以下四個步驟：

1) 脫氫：脂酰-CoA 被?；鵆oA脫氫酶氧化成烯酰基-CoA,；

2) 水合：烯酰-CoA-被烯酰-CoA水合酶合成-3-羥基乙酰-CoA,；

3) 氧化：3-羥基乙酰-CoA轉化為 3-酮酰-CoA；

4) 硫解：3-酮酰-CoA轉化為?；?CoA（Cn-2）和乙酰-CoA,。乙酰-CoA進一步轉化為ATP。生成的?；?CoA（Cn-2）進入另一個FAO循環(huán),，進一步生成酰基-CoA（Cn-4）,。

研究表明,，FAO代謝異常與肥胖和非酒精性脂肪肝病（NAFLD）等多種疾病密切相關,，因此檢測FAO活性對于診斷相關疾病至關重要,。但由于FAO過程較為復雜，使得在活細胞中檢測FAO活性的方法非常有限,。目前只有一些間接方法,，如使用含放射性同位素的脂肪酸或測量耗氧量。

FAOBlue作為首-款直接測量活細胞中FAO活性的試劑,，只需在培養(yǎng)基中加入FAOBlue,，即可通過熒光成像，簡單地檢測出活細胞中FAO的活性,。

FAOBlue原理

FAOBlue是一種具有被乙酰氧甲基酯保護的壬酸（C9）的香-豆-素染料,。在被FAO代謝之前,，FAOBlue在405 nm下不會激發(fā)熒光。FAOBlue的乙酰氧基甲酯可被細胞內的酯酶水解,，使FAOBlue可直接穿透細胞膜進入細胞,，轉化為游離脂肪酸（Free FA type）；Free FA type會轉化為Acyl-CoA,，并進入FAO循環(huán),；Acyl-CoA 經過3次FAO循環(huán)分解為含有丙酸（C3）的非熒光香-豆-素。經過第4次FAO循環(huán)后,，香-豆-素染料從丙酸中釋放出來并擴散到整個細胞,。此時整個細胞內的香-豆-素在405 nm下發(fā)出強烈的藍色熒光，可視化地定量檢測細胞中FAO的活性,。

產品信息

產品特點

操作簡單,，加入培養(yǎng)基后，孵育30-120min即可觀察熒光,；

實例驗證適用于多種細胞類型,。

產品應用

FAO活性的相對定量

評估藥物對FAO活性的影響

實驗步驟

使用前請先按照說明書中的Reconstitution步驟，用DMSO對FAOBlue試劑進行溶解,，制成Stock solution,，按照說明書中的要求保存。

以下實驗步驟僅供參考,，請按照產品說明書操作：

1,、在新鮮的HEPES緩沖液（HBS）中加入FAOBlue（最終濃度為5-20μM）；

注：可用無血清培養(yǎng)基代替HBS

2,、去除培養(yǎng)基,，用HBS清洗細胞2次；

3,、向細胞中加入含FAOBlue的HBS,；

4、在37℃下培養(yǎng)30 min以上,；

注：不同細胞類型最佳培養(yǎng)時間有所不同,，建議根據具體情況而定。

5,、用HBS清洗細胞,；

6、通過成像觀察活細胞中的藍色熒光（Ex. 405 nm/Em. 430～480 nm）,。

成像指南

激光共聚焦顯微鏡：使用顯微鏡中配備的405 nm激光

落射熒光顯微鏡：激發(fā)濾光片非常重要,，建議使用波長為 390-450 nm的激發(fā)濾光片

如需購買Funakoshi產品，咨詢產品技術問題，請聯系Funakoshi授權代理商欣博盛生物,。