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腺相關病毒 (AAV) 是基因治療中使用最-廣泛的傳遞機制。近年來,，基于AAV病毒所開發(fā)的基因療法的研發(fā)及臨床試驗注冊數量也呈指數級增長,。截止本文撰寫之時，美國食品和藥物管理局已批準五項AAV療法,，也是全球市場上最為昂貴的藥物,，其中售價最高的Hemgenix®，每劑約為350萬美元,。由于該療法每劑量可能需要1011-1016病毒載量,，如何實現高效的AAV生產，已成為工藝流程優(yōu)化中的重要一環(huán),。
在病毒生產工藝方面，除了需要克服細胞遞轉過程中的多重阻礙,，以實現更高效轉染和更低細胞毒性,；增強子的加入，可大幅度提升多種血清型AAV病毒生產載量,。但Mirus并沒有止步于此,，為了進一步提高下游生產中的AAV病毒基因組產量， 今年七月底Mirus發(fā)布用于AAV生產的RevIT™ AAV Enhancer,，可搭配Mirus TransIT-VirusGEN® GMP 轉染試劑或其他品牌轉染試劑 (PEI),。基于HEK293懸浮細胞數據,，相對于老版本AAV生產,，RevIT™ AAV Enhancer可提高AAV基因組滴度1.2-4.9倍，并且便于使用,，很容易整合入現有AAV生產工藝工作流程中,。Mirus RevIT™ AAV Enhancer的推出，使得AAV上產上游成本進一步降低成為可能,，降低了基因治療單劑量成本,。
● RevIT™ AAV Enhancer：可1.2-4.9X提升AAV病毒基因組滴度
平行對比Mirus TransIT-VirusGEN®搭配老版本AAV增強子(VirusGen + Enh 1.0)以及新版本RevIT™ AAV Enhancer (VirusGen + RevIT),，針對不同血清型 AAV2、AAV8,、AAV9,，AAV基因組滴度分別有著1.6、4.9以及1.2倍提升,。除此之外,，實驗結果顯示,，在測試的所有血清型中，使用RevIT™ AAV Enhancer也在不同程度上得到更高比例的實心率 (圖1),。實驗結果表明,，在搭配Mirus TransIT-VirusGEN®轉染試劑時，可顯著提高病毒基因組滴度(GC/mL)及實心率(%Full Capsids),。
?圖1. 在加入RevIT™ AAV Enhancer后,，相比Mirus老版本增強子，可1.2-4.9X提升AAV基因組拷貝數,，改善AAV病毒實心率,。
● RevIT™ AAV Enhancer：具有廣泛適配性,，可搭配其他品牌轉染試劑（PEI）,，AAV病毒基因組滴度有著顯著提升
平行測試兩個品牌轉染試劑：Polyplus FectoVIR® 病毒轉染試劑(“Polymer F")以及Polyplus PEIpro®病毒轉染試劑(“Polymer P")，在加入Mirus RevIT™ AAV Enhancer,，針對不同血清型AAV2,、AAV8、AAV9,，AAV基因組滴度分別有著1.7-2.0x,、1.7-2.2x、2.2-2.3x提升(圖2),。實驗結果表明,，在搭配其他品牌病毒轉染試劑時，Mirus RevIT™ AAV Enhancer可顯著提高AAV病毒基因組滴度(GC/mL),。
?圖2. “Polymer F"以及“Polymer P"病毒轉染試劑,，在搭配Mirus RevIT™ AAV Enhancer，針對不同血清型,，其AAV病毒基因組滴度都有著顯著提升,。
● RevIT™ AAV Enhancer：具有廣泛的適配性,，可適用于不同培養(yǎng)基體系
TransIT-VirusGEN®轉染試劑搭配RevIT™ AAV Enhancer,，在不同類型病毒生產培養(yǎng)基中，具有很好的兼容性。測試使用293-VP 2.0細胞,，搭配培養(yǎng)基類型包括VPM (Thermo Fisher) 及 BalanCD HEK 293 (Irvine Scientific),。實驗結果表明，針對不同血清型AAV2,、AAV5,、AAV8、AAV9,，RevIT™ AAV Enhancer在不同培養(yǎng)基實驗條件下,，AAV病毒基因組滴度提升方面并無顯著差異。
?圖3. 更換不同品牌病毒生產培養(yǎng)基,，AAV病毒基因組滴度的增加無顯著差異,。
● RevIT™ AAV Enhancer：實驗流程靈活性,，不同加入時間窗口有著近似表現
為了進一步確定加入RevIT™ AAV Enhancer可有效提高AAV病毒基因組載量,，是否需要嚴格把控加入時間窗口。平行測試不同加入時間點,，包括轉染前30或60分鐘,、轉染時及轉染后。實驗結果顯示,，相對于對照,，在加入RevIT™ AAV Enhancer不同測試時間點， AAV8病毒基因組滴度都有穩(wěn)步的提升(2倍),，并且病毒實心率穩(wěn)定保持在相同水平,。該組實驗結果表明，RevIT™ AAV Enhancer加入時間點的靈活性,，一定程度上簡化了生產工作流,。
?圖4. RevIT™ AAV Enhancer加入時間點的靈活性
● 實驗tips：如何進行病毒轉染試劑評估？什么是病毒載量？如何檢測,？
更多詳細信息,，請查看Technical Resources中Virus Titer Reference Card
? 相關產品信息
| 產品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 | 鏈接 |
| RevIT™ AAV Enhancer | 1.5 ml | MIR 8000 | link |
| 10 x 1.5 ml | MIR 8006 | ||
| VirusGEN® AAV轉染試劑及RevIT™ AAV Enhancer | For 1L of Culture | MIR 8007 | |
| For 10L of Culture | MIR 8008 | ||
| TransIT-VirusGEN®轉染試劑 | 0.3 ml | MIR 6703 | link |
| 0.75 ml | MIR 6704 | ||
| 1.5 ml | MIR 6700 | ||
| 5 x 1.5 ml | MIR 6705 | ||
| 10 x 1.5 ml | MIR 6706 | ||
| 30 ml | MIR 6720 | ||
| TransIT-VirusGEN® GMP級別轉染試劑 | 150 ml | MIR 6845-GMP | link |
| VirusGEN® AAV轉染試劑(套裝) | 1 kit for 1 L of cell culture | MIR 6750 | link |
| VirusGEN® GMP級別AAV轉染試劑(套裝) | 1 Kit - for 50 L of cell culture | MIR 6815-GMP | link |
| VirusGEN® LV轉染試劑(套裝) | 1 kit for 1 L of cell culture | MIR 6760 | link |
| VirusGEN® GMP級別LV轉染試劑(套裝) | 1 Kit - for 50 L of cell culture | MIR 6825-GMP | link |
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