細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)簡(jiǎn)介

時(shí)間：2016/12/13閱讀：1444

細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)是將外源基因?qū)胝婧思?xì)胞內(nèi)的一種實(shí)驗(yàn)技術(shù)。常規(guī)轉(zhuǎn)染技術(shù)分為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染（*轉(zhuǎn)染）和瞬時(shí)轉(zhuǎn)染兩類,。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染是指外源DNA 既可以整合到宿主染色體中,，也可能作為一種游離體存在。瞬時(shí)轉(zhuǎn)染則指外源DNA/RNA 不整合到宿主染色體中,，一個(gè)宿主細(xì)胞中可存在多個(gè)拷貝數(shù)，產(chǎn)生高水平的表達(dá),，但通常只持續(xù)幾天，多用于啟動(dòng)子和其它調(diào)控元件的分析,。

轉(zhuǎn)染大致可分為物理介導(dǎo),、化學(xué)介導(dǎo)和生物介導(dǎo)三類途徑。電穿孔法,、顯微注射和基因槍屬于通過(guò)物理方法將基因?qū)爰?xì)胞的范例;化學(xué)介導(dǎo)方法很多,，如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法、和多種陽(yáng)離子物質(zhì)介導(dǎo)的技術(shù);生物介導(dǎo)方法,，有較為原始的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)染,，和現(xiàn)在比較多見(jiàn)的各種病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)。

各種轉(zhuǎn)染方法的比較

轉(zhuǎn)染方法	原理	應(yīng)用	特點(diǎn)
電穿孔法	高脈沖電壓破壞細(xì)胞膜電位,，DNA通過(guò)膜上形成的小孔導(dǎo)入	穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,，瞬時(shí)轉(zhuǎn)染均適用。	適用性廣但細(xì)胞致死率高,；DNA 和細(xì)胞用量大,；需根據(jù)不同細(xì)胞類型優(yōu)化電穿孔實(shí)驗(yàn)條件。
顯微注射	用顯微操作將DNA 直接注入靶細(xì)胞核	適用于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染和瞬時(shí)轉(zhuǎn)染	轉(zhuǎn)染細(xì)胞數(shù)有限,，多用于工程改造或轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的胚胎細(xì)胞
磷酸鈣法	磷酸鈣DNA復(fù)合物吸附細(xì)胞膜被細(xì)胞內(nèi)吞	適用于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染和瞬時(shí)轉(zhuǎn)染	不適用于原代細(xì)胞,，操作簡(jiǎn)便但重復(fù)性差有些細(xì)胞不適用
陽(yáng)離子脂質(zhì)體法	帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成復(fù)合物被細(xì)胞內(nèi)吞	適用于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染和瞬時(shí)轉(zhuǎn)染所有細(xì)胞	適用性廣，轉(zhuǎn)染效率高,，重復(fù)性好,，但轉(zhuǎn)染時(shí)需除血清,；轉(zhuǎn)染效果隨細(xì)胞類型變化大
DEAE-右旋糖苷法	帶正電的DEAE-右旋糖苷與核酸帶負(fù)電的磷酸骨架相互作用形成的復(fù)合物被細(xì)胞內(nèi)吞	瞬時(shí)性轉(zhuǎn)染	相對(duì)簡(jiǎn)便、結(jié)果可重復(fù),，但對(duì)細(xì)胞有一定的毒副作用,；轉(zhuǎn)染時(shí)需除血清
病毒介導(dǎo)法	通過(guò)侵染宿主細(xì)胞將外源基因整合到染色體中	穩(wěn)定轉(zhuǎn)染	可用于難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞、原代細(xì)胞,，體內(nèi)細(xì)胞等

Mirus是首先研發(fā)出siRNA轉(zhuǎn)染試劑的公司,，也是世界上zui早開(kāi)發(fā)、低細(xì)胞毒性轉(zhuǎn)染試劑的公司之一,。Mirus以“非病毒(如基于質(zhì)粒DNA)法基因轉(zhuǎn)移技術(shù)比利用病毒來(lái)轉(zhuǎn)移基因具有明顯的優(yōu)勢(shì)”為理念,，沿著該思路，Mirus利用蛋白,、多聚物,、脂質(zhì)體（結(jié)合有增強(qiáng)核酸轉(zhuǎn)移能力的*化學(xué)物）開(kāi)創(chuàng)了多種非病毒法基因轉(zhuǎn)移技術(shù)。主要提供的轉(zhuǎn)染試劑有：廣譜性低毒轉(zhuǎn)染試劑,、細(xì)胞系特異性轉(zhuǎn)染試劑,、RNA轉(zhuǎn)染試劑、昆蟲(chóng)轉(zhuǎn)染試劑、3D培養(yǎng)細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑和電轉(zhuǎn)試劑等,。

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