平時在實驗室常聽到的一句話就是“今天某某試驗沒做好是為什么？今天某某試驗沒出結(jié)果是什么原因,？今天某某試驗為什么會是這樣的呢,？” 等等。
然后仔細(xì)一查找原因,，往往是由于操作上面的不認(rèn)真,，或是一些小小的細(xì)節(jié)沒有注意到。以下是集各路朋網(wǎng)友的一些實戰(zhàn)經(jīng)驗，在此與大家分享：
1. 跑page膠的時候
小電壓跑會避免高電壓產(chǎn)生的熱量爾導(dǎo)致的膠層變形,。低電壓泳道會比大電壓泳道跑的直一些,，且分離效果更高，有利于分子量相差不大的蛋白分離,。
2. 提取質(zhì)粒的時候
后一步的酒精揮發(fā)很關(guān)鍵,，基本上是其后續(xù)的酶切反應(yīng)的決定性因素。所以這一步盡量揮發(fā)長一點時間,，是空調(diào)吹熱風(fēng),，或是37度溫箱放長一點的時間，我試過室溫過夜,，酶切很好,。
3. 做WESTERN BLOT 的時候
大家往往會摸索一抗、二抗的濃度,，封閉時間,，曝光時間等等，而每次變換其中的一個條件就需要從新跑膠,、轉(zhuǎn)膜,，甚至重新提蛋白，這樣會浪費大量的時間,。其實*沒有必要這樣,。一次轉(zhuǎn)膜后，將PVDF膜晾干,，裁減成小塊,，保存起來，用的時候取出一塊,，沒有任何影響,。這對于摸索條件的戰(zhàn)友來說，節(jié)約了大量的時間,。
4. 有關(guān)緩沖液和培養(yǎng)基配置
1)將緩沖液配方中的成分分別以10-100倍配成母液儲存，需要的時候只需將相應(yīng)的母液混合,，補(bǔ)加水稀釋即可,。
2)配培養(yǎng)基時通常會忘記各成分的量，如配LB時的三個成分不記得到底哪個是5g,，哪個要10個,，因此可以在常用的試劑瓶的標(biāo)簽上注明所需的量，如配LB時,，在NaCl瓶外注明10g/L, yeast 5 g/L, tryton 10 g/L等,，很方便，不需要每次配之前臨時翻書。
5. 有關(guān)PCR主反應(yīng)液配置
在做克隆鑒定的時候經(jīng)常需要在酶切鑒定前進(jìn)行PCR鑒定,，每次配置PCR反應(yīng)液很繁瑣,，可以將其配置類似kit的形式，按你需要的反應(yīng)體系列表,，然后放大100倍配置100×主反應(yīng)液(100次反應(yīng)),，其中含buffer，Mg2+,，dNTPs,，但不含引物和Taq酶，然后可以10×分裝或一管儲存在-20度,，在需要的時候拿出融開,，然后按所需的PCR反應(yīng)個數(shù)吸取相應(yīng)的倍數(shù)，再補(bǔ)加相應(yīng)反應(yīng)倍數(shù)的Taq和引物,，混勻后分裝,，這樣做的好處如下：
1)可極大的節(jié)省寶貴的時間，可早點收工,，看球,；
2)避免每次反應(yīng)加樣不均的可能；
3)大大減少PCR假陽性的產(chǎn)生,。
6. 有關(guān)酶切反應(yīng)液的配置
在做酶切時,，也可以象PCR一樣配置主反應(yīng)液，每次反應(yīng)前先列好反應(yīng)的體系,，算好需要的反應(yīng)數(shù),，然后按所需反應(yīng)的體系按所需反應(yīng)數(shù)放大，加入buffer,、酶,、水，質(zhì)粒欄空缺,，然后混合后按除質(zhì)粒DNA的體積分裝,，然后再在每管中加入相應(yīng)體積的質(zhì)粒DNA酶切，這樣做的好處如下,，特別是當(dāng)同時有10幾個陽性克隆需要鑒定時尤為明顯：
1)各反應(yīng)成分均一,；
2)可大大減少限制型內(nèi)切酶的使用；
3)節(jié)省時間,。
7. 有關(guān)SDS－PAGE：
1)可將SDS-PAGE的積層膠,，分離膠預(yù)先配好大體積如100ml儲存在4度冰箱(注：10%AP，TEMED不加,，切記!!!),，每次配置時只需吸取相應(yīng)體積的預(yù)制膠加入AP,，TEMED即可，沒必要每次制膠時候翻分子克隆,，特別方便,，而且，這樣的預(yù)制膠可儲存半年以上,，不失為偷懶的方法;更關(guān)鍵的是可大大減少與丙稀酰胺的接觸,，因此大大減少中毒的機(jī)會。2)電泳時雖然小電泳分離效果要好一些,，但2小時以上的等待的時間實在是痛苦,，因此可以提高電泳至150V，但需要將整個電泳槽放在放滿冰水的臉盆里散熱,，這樣跑出來的膠分離效果絲毫不比低電壓來的差,，關(guān)鍵是時間大大節(jié)省，不需1h即可看結(jié)果了,。
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