一、培養(yǎng)基的滅菌及使用
(1)每次配置時,,要注意其生產(chǎn)日期是否在保質(zhì)期內(nèi),,查看其開瓶日期及瓶口密封性,保證其未變質(zhì),并且未吸潮,。
(2)培養(yǎng)基配置時,,稱量要準(zhǔn)確,包括鹽水的分裝要準(zhǔn)確,。
(3)一定要保證現(xiàn)配制現(xiàn)滅菌,,未滅菌的配好培養(yǎng)基不能長時間放置,更不可隔夜,。
(4)滅菌時要保證恒溫,、恒壓,同時要保證有效滅菌時間,。
(5)滅菌過的培養(yǎng)基要冰箱保存,,可保存一周,一般不超過 3 天,。而且要遵循“先入先出”原則,先配制的要先使用,。
(6)在使用時,,要根據(jù)當(dāng)班次的使用量,用水浴鍋先將培養(yǎng)基溶化為液態(tài),,然后及時調(diào)低水域溫度(先化好的可從水域取出,,放在水浴鍋鍋蓋上)待用,千萬不可長時間使培養(yǎng)基處于高溫狀態(tài),。
(7)做產(chǎn)品微生物檢測時,,傾倒培養(yǎng)基溫度在 45℃左右,不可過燙,,避免將菌燙死,;也不可過涼,化好的培養(yǎng)基又結(jié)塊凝固,,不便于觀察結(jié)果,。
(8)每瓶培養(yǎng)基均要做空白。
(9)盡量集中做樣,,避免頻繁打開同一瓶培養(yǎng)基瓶塞,,增大培養(yǎng)基的污染幾率,出現(xiàn)誤差結(jié)果,。
(10)培養(yǎng)基剩余過少時,,可先將其傾倒成空白用板。
二,、 做樣環(huán)境的維持
(1)大環(huán)境(房間)
1)做樣時,,窗戶和空調(diào)要關(guān)閉,或用酒精對房間進(jìn)行噴霧消毒,避免房間內(nèi)空氣流通影響超凈臺內(nèi)部環(huán)境(在有通排風(fēng)系統(tǒng)的恒溫恒濕無菌間進(jìn)行操作),。
2)如果在原來的原料微生物檢測室進(jìn)行做樣,,要定期開啟紫外燈,對房間進(jìn)行殺菌,。
(2)小環(huán)境(超凈臺)
1)定期清潔初效過濾器,,要及時更換。
2)做樣前,,將超凈臺內(nèi)部進(jìn)行清潔,,用 75%酒精進(jìn)行擦拭消毒,并提前半小時將超凈臺紫外燈打開,,對超凈臺內(nèi)部環(huán)境進(jìn)行殺菌,。
3)關(guān)紫外燈,開風(fēng)機(jī),,調(diào)整合適進(jìn)風(fēng)量,,風(fēng)量不可過低。
4)每次做樣后,,要對超凈臺內(nèi)部進(jìn)行清理,、清潔,并用 75%酒精進(jìn)行擦拭消毒,。
5)紫外燈根據(jù)其使用壽命要及時更換,。
6)做樣同時,要做上相應(yīng)菌落檢測的環(huán)境空白,。
7)做樣區(qū)域的選擇:
a,、一般在距離超凈臺外沿的 1/3-2/3 區(qū)域進(jìn)行無菌操作;
b,、要在酒精燈火焰的外焰保護(hù)區(qū)域進(jìn)行操作,。
三、 工器具的潔凈度
(1)玻璃器皿:采用干熱滅菌方式進(jìn)行滅菌,。
(2)做樣用剪刀,、勺子等物品要做到做樣,不可與其它操作器具混用,,使用時,,先用75%酒精消毒,再采用灼燒方式進(jìn)行滅菌,。
(3)接種針(環(huán))采用灼燒方式進(jìn)行滅菌,,但要注意做樣時要先將接種針(環(huán))進(jìn)行冷卻。
四,、樣品的采集及檢測
(1)保證采樣器具的無菌性
1)玻璃器皿:采用干熱滅菌方式進(jìn)行滅菌,,保證恒溫,、時間足夠(但不可時間過長,導(dǎo)致玻璃器皿易裂紋而報廢),。
2)取樣筐:使用前要用 75%酒精進(jìn)行噴灑消毒
3)取樣勺,、濃奶取樣提子:要保證其清潔消毒,清潔后用 75%酒精進(jìn)行擦拭消毒,。
4)取樣袋:可現(xiàn)用酒精進(jìn)行擦拭消毒,,再在超凈臺用紫外燈照射消毒,(包裝車間要在傳遞窗用紫外燈照射消毒),。
5)電子稱表面用 75%酒精消毒,。
(2)人員操作
1)保證手部的清洗、消毒:取樣前及做樣前都要先洗手再消毒,。
2)取樣要具有代表性(隨機(jī)樣,、目的樣、綜合樣)且要標(biāo)示清楚,。
3)取樣完畢,,不可在車間逗留,要及時將樣品放入超凈臺,,對其外表面進(jìn)行紫外燈照射消毒,。
4)在要求的做樣區(qū)域進(jìn)行操作。
5)做樣前,,要用 75%酒精棉球?qū)悠反诓窟M(jìn)行擦拭消毒,再開口,。
6)往鹽水瓶加樣品時,,要注意勺子或袋子盡量不接觸瓶口。
7)樣品計(jì)量要準(zhǔn)確,,稀釋倍數(shù)也要準(zhǔn)確(1mL 吸管不允許將管口敲掉),,進(jìn)行 100 倍稀釋時,1mL 吸管要伸入鹽水中,,不可以將樣品管壁流下去,,同時要避免將管底部捅破。
8)鹽水溫度以 40℃左右為宜,,不能過熱,,將部分微生物燙死,也不能溫度太低,,不能將奶粉溶解*,。
9)進(jìn)行稀釋時,要搖勻,,保證溶液的均一性,。
10)傾倒平皿時,,要注意培養(yǎng)基瓶口不要接觸到平皿;傾倒的培養(yǎng)基要適量,,不可以太少,,在培養(yǎng)過程中干掉,微生物亦死亡,,以 15mL 左右為宜,。
11)做大腸菌群樣時,要提前將乳糖膽鹽培養(yǎng)基培養(yǎng)管按需要量備好,,放入超凈臺對外表面進(jìn)行紫外線滅菌,。
12)接二步時,要注意先將接種針(環(huán))進(jìn)行冷卻,,避免出現(xiàn)接不上菌落的情況發(fā)生,,導(dǎo)致無法判斷、確認(rèn),。
13)做樣完畢,,及時放入相應(yīng)培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng),并清理清潔超凈臺,。
五,、 微生物的培養(yǎng)
(1)在培養(yǎng)過程中,要隨時監(jiān)控培養(yǎng)箱溫度,,保證其在適宜的溫度進(jìn)行培養(yǎng),。
(2)要按照《微生物檢驗(yàn)規(guī)范》要求及時觀察結(jié)果,出現(xiàn)異常,,要及時分析原因進(jìn)行反饋,。
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