一、培養(yǎng)基的滅菌及使用
（1）每次配置時,，要注意其生產(chǎn)日期是否在保質(zhì)期內(nèi),，查看其開瓶日期及瓶口密封性，保證其未變質(zhì)，并且未吸潮,。
（2）培養(yǎng)基配置時,，稱量要準(zhǔn)確，包括鹽水的分裝要準(zhǔn)確,。
（3）一定要保證現(xiàn)配制現(xiàn)滅菌,，未滅菌的配好培養(yǎng)基不能長時間放置，更不可隔夜,。
（4）滅菌時要保證恒溫,、恒壓，同時要保證有效滅菌時間,。
（5）滅菌過的培養(yǎng)基要冰箱保存,，可保存一周，一般不超過 3 天,。而且要遵循“先入先出”原則，先配制的要先使用,。
（6）在使用時,，要根據(jù)當(dāng)班次的使用量，用水浴鍋先將培養(yǎng)基溶化為液態(tài),，然后及時調(diào)低水域溫度（先化好的可從水域取出,，放在水浴鍋鍋蓋上）待用，千萬不可長時間使培養(yǎng)基處于高溫狀態(tài),。
（7）做產(chǎn)品微生物檢測時,，傾倒培養(yǎng)基溫度在 45℃左右，不可過燙,，避免將菌燙死,；也不可過涼，化好的培養(yǎng)基又結(jié)塊凝固,，不便于觀察結(jié)果,。
（8）每瓶培養(yǎng)基均要做空白。
（9）盡量集中做樣,，避免頻繁打開同一瓶培養(yǎng)基瓶塞,，增大培養(yǎng)基的污染幾率，出現(xiàn)誤差結(jié)果,。
（10）培養(yǎng)基剩余過少時,，可先將其傾倒成空白用板。
二,、 做樣環(huán)境的維持
（1）大環(huán)境（房間）
1）做樣時,，窗戶和空調(diào)要關(guān)閉，或用酒精對房間進(jìn)行噴霧消毒，避免房間內(nèi)空氣流通影響超凈臺內(nèi)部環(huán)境（在有通排風(fēng)系統(tǒng)的恒溫恒濕無菌間進(jìn)行操作）,。
2）如果在原來的原料微生物檢測室進(jìn)行做樣,，要定期開啟紫外燈，對房間進(jìn)行殺菌,。
（2）小環(huán)境（超凈臺）
1）定期清潔初效過濾器,，要及時更換。
2）做樣前,，將超凈臺內(nèi)部進(jìn)行清潔,，用 75%酒精進(jìn)行擦拭消毒，并提前半小時將超凈臺紫外燈打開,，對超凈臺內(nèi)部環(huán)境進(jìn)行殺菌,。
3）關(guān)紫外燈，開風(fēng)機(jī),，調(diào)整合適進(jìn)風(fēng)量,，風(fēng)量不可過低。
4）每次做樣后,，要對超凈臺內(nèi)部進(jìn)行清理,、清潔，并用 75%酒精進(jìn)行擦拭消毒,。
5）紫外燈根據(jù)其使用壽命要及時更換,。
6）做樣同時，要做上相應(yīng)菌落檢測的環(huán)境空白,。
7）做樣區(qū)域的選擇：
a,、一般在距離超凈臺外沿的 1/3-2/3 區(qū)域進(jìn)行無菌操作；
b,、要在酒精燈火焰的外焰保護(hù)區(qū)域進(jìn)行操作,。
三、 工器具的潔凈度
（1）玻璃器皿：采用干熱滅菌方式進(jìn)行滅菌,。
（2）做樣用剪刀,、勺子等物品要做到做樣，不可與其它操作器具混用,，使用時,，先用75%酒精消毒，再采用灼燒方式進(jìn)行滅菌,。
（3）接種針（環(huán)）采用灼燒方式進(jìn)行滅菌,，但要注意做樣時要先將接種針（環(huán)）進(jìn)行冷卻。
四,、樣品的采集及檢測
（1）保證采樣器具的無菌性
1）玻璃器皿：采用干熱滅菌方式進(jìn)行滅菌,，保證恒溫,、時間足夠（但不可時間過長，導(dǎo)致玻璃器皿易裂紋而報廢）,。
2）取樣筐：使用前要用 75%酒精進(jìn)行噴灑消毒
3）取樣勺,、濃奶取樣提子：要保證其清潔消毒，清潔后用 75%酒精進(jìn)行擦拭消毒,。
4）取樣袋：可現(xiàn)用酒精進(jìn)行擦拭消毒,，再在超凈臺用紫外燈照射消毒，（包裝車間要在傳遞窗用紫外燈照射消毒）,。
5）電子稱表面用 75%酒精消毒,。
（2）人員操作
1）保證手部的清洗、消毒：取樣前及做樣前都要先洗手再消毒,。
2）取樣要具有代表性（隨機(jī)樣,、目的樣、綜合樣）且要標(biāo)示清楚,。
3）取樣完畢,，不可在車間逗留，要及時將樣品放入超凈臺,，對其外表面進(jìn)行紫外燈照射消毒,。
4）在要求的做樣區(qū)域進(jìn)行操作。
5）做樣前,，要用 75%酒精棉球?qū)悠反诓窟M(jìn)行擦拭消毒，再開口,。
6）往鹽水瓶加樣品時,，要注意勺子或袋子盡量不接觸瓶口。
7）樣品計(jì)量要準(zhǔn)確,，稀釋倍數(shù)也要準(zhǔn)確（1mL 吸管不允許將管口敲掉）,，進(jìn)行 100 倍稀釋時，1mL 吸管要伸入鹽水中,，不可以將樣品管壁流下去,，同時要避免將管底部捅破。
8）鹽水溫度以 40℃左右為宜,，不能過熱,，將部分微生物燙死，也不能溫度太低,，不能將奶粉溶解*,。
9）進(jìn)行稀釋時，要搖勻,，保證溶液的均一性,。
10）傾倒平皿時,，要注意培養(yǎng)基瓶口不要接觸到平皿；傾倒的培養(yǎng)基要適量,，不可以太少,，在培養(yǎng)過程中干掉，微生物亦死亡,，以 15mL 左右為宜,。
11）做大腸菌群樣時，要提前將乳糖膽鹽培養(yǎng)基培養(yǎng)管按需要量備好,，放入超凈臺對外表面進(jìn)行紫外線滅菌,。
12）接二步時，要注意先將接種針（環(huán)）進(jìn)行冷卻,，避免出現(xiàn)接不上菌落的情況發(fā)生,，導(dǎo)致無法判斷、確認(rèn),。
13）做樣完畢,，及時放入相應(yīng)培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)，并清理清潔超凈臺,。
五,、 微生物的培養(yǎng)
（1）在培養(yǎng)過程中，要隨時監(jiān)控培養(yǎng)箱溫度,，保證其在適宜的溫度進(jìn)行培養(yǎng),。
（2）要按照《微生物檢驗(yàn)規(guī)范》要求及時觀察結(jié)果，出現(xiàn)異常,，要及時分析原因進(jìn)行反饋,。
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