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產(chǎn)品簡介：

在研究細(xì)胞時(shí)經(jīng)常要研究細(xì)胞的不同組份,，而研究得zui多的兩個(gè)細(xì)胞組份就是細(xì)胞核和細(xì)胞漿,。分離細(xì)胞核蛋白和細(xì)胞漿蛋白,，不僅可以用于研究蛋白在細(xì)胞內(nèi)的定位，而且很多時(shí)候分離出來的核蛋白可以用于轉(zhuǎn)錄調(diào)控方面的研究,，例如EMSA(也稱gelshift)，footprinting等,。
    (Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit)提供了一種比較簡單、方便的從培養(yǎng)細(xì)胞或新鮮組織中抽提細(xì)胞核蛋白與細(xì)胞漿蛋白的方法,。約90分鐘就可以完成培養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞核蛋白與細(xì)胞漿蛋白的分離。抽提得到的蛋白可以用于Western,，EMSA,，footprinting，報(bào)告基因檢測以及酶活力測定等后續(xù)操作,。
    本試劑盒是通過細(xì)胞漿蛋白抽提試劑A和B,，在低滲透壓條件下,，使細(xì)胞充分膨脹,，然后破壞細(xì)胞膜,，釋放出細(xì)胞漿蛋白，然后通過離心得到細(xì)胞核沉淀,。zui后通過高鹽的細(xì)胞核蛋白抽提試劑抽提得到細(xì)胞核蛋白,。
    本試劑盒可以抽提50個(gè)樣品，如果每個(gè)樣品的數(shù)量為約二百萬細(xì)胞或約60毫克組織,。
包裝清單：

保存條件：
    -20℃保存,，一年有效。
注意事項(xiàng)： 
    PMSF一定要在抽提試劑加入到樣品中前2-3分鐘內(nèi)加入,，以免PMSF在水溶液中很快失效。
    抽提蛋白的所有步驟都需在冰上或4℃進(jìn)行。
    本試劑盒對于組織樣品,，僅適合于新鮮組織,，對凍存過的組織抽提效果很差,?？梢猿樘岬慕M織樣品數(shù)通常不足100個(gè),。
    使用本試劑盒抽提到的細(xì)胞核蛋白與細(xì)胞漿蛋白均可直接用我們生產(chǎn)的BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度,。但不適合用Bradford法測定蛋白濃度,。
    為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作,。

使用說明：
1. 準(zhǔn)備溶液：溫融解試劑盒中的三種試劑,，溶解后立即放置在冰上,，混勻。取適當(dāng)量的細(xì)胞漿蛋白抽提試劑A備用,，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF,，使PMSF的zui終濃度為1mM,。取適當(dāng)量的細(xì)胞核蛋白抽提試劑備用,，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的zui終濃度為1mM,。
2. 對于貼壁細(xì)胞：用PBS洗一遍,，用細(xì)胞刮子刮下細(xì)胞，或用EDTA溶液處理細(xì)胞使細(xì)胞不再貼壁很緊,，并用移液器吹打下細(xì)胞,。離心收集細(xì)胞，盡zui大努力吸盡上清,，留下細(xì)胞沉淀備用,。盡量避免用胰酶消化細(xì)胞，以免胰酶降解需抽提的目的蛋白,。
3. 對于懸浮細(xì)胞：用PBS洗一遍,，離心收集細(xì)胞，盡zui大努力吸盡上清，留下細(xì)胞沉淀備用,。
4. 每20微升細(xì)胞沉淀加入200微升添加了PMSF的細(xì)胞漿蛋白抽提試劑A,。(對于二百萬Hela細(xì)胞，其細(xì)胞沉淀的體積大約為20微升或40毫克,。)
5. zui高速劇烈Vortex 5秒,，把細(xì)胞沉淀*懸浮并分散開。(如果細(xì)胞沉淀沒有*懸浮并分散開,，可以適當(dāng)延長vortex時(shí)間,。)
6. 冰浴10-15分鐘。
7. 加入細(xì)胞漿蛋白抽提試劑B 10微升,。zui高速劇烈Vortex 5秒,，冰浴1分鐘。
8. zui高速劇烈Vortex 5秒,，4℃ 12,000-16,000g離心5分鐘,。
9. 立即吸取上清至一預(yù)冷的塑料管中，即為抽提得到的細(xì)胞漿蛋白,?？梢粤⒓词褂茫部梢詢龃?。(千萬不要觸及沉淀,，可以在沉淀上方保留極小體積的上清，以免觸及沉淀,。)
10. 對于沉淀,，*吸盡殘余的上清，加入50微升添加了PMSF的細(xì)胞核蛋白抽提試劑,。(不吸盡上清會(huì)帶來細(xì)胞漿蛋白的污染,。)
11. zui高速劇烈Vortex 15-30秒，把細(xì)胞沉淀*懸浮并分散開,。然后放回冰浴中,，每隔1-2分鐘再高速劇烈Vortex 15-30秒，共30分鐘,。
12. 4℃ 12,000-16,000g離心10分鐘,。
13. 立即吸取上清至一預(yù)冷的塑料管中，即為抽提得到的細(xì)胞核蛋白,?？梢粤⒓词褂茫部梢?70℃凍存,。
14. 對于新鮮組織：
    A. 把組織盡可能切成非常細(xì)小的碎片,。按照20:1的比例混合適當(dāng)量的細(xì)胞漿蛋白抽提試劑A和B(例如200微升細(xì)胞漿蛋白抽提試劑A中加入10微升抽提試劑B),。并加入PMSF至zui終濃度為1mM配制成組織勻漿液。按照每60mg組織加入200微升組織勻漿液的比例混合組織和組織勻漿液,，并在玻璃勻漿器內(nèi)充分勻漿,。勻漿需在冰浴或4℃進(jìn)行。
    B. 勻漿后把勻漿液轉(zhuǎn)移到塑料離心管內(nèi),，冰浴放置15分鐘,。
    C. 4℃ 1,500g離心5分鐘。把上清轉(zhuǎn)移至一預(yù)冷的塑料管中,，為抽提得到的部分細(xì)胞漿蛋白,。(吸上清時(shí)千萬不要觸及沉淀。)
    D. 對于沉淀,，到了這一步已經(jīng)充分勻漿,，但很多細(xì)胞還沒有破碎。接下去按照使用說明的步驟4開始操作,，即把沉淀當(dāng)做已經(jīng)離心收集好的細(xì)胞沉淀操作,，按照步驟4至步驟13抽提得到細(xì)胞漿蛋白和細(xì)胞核蛋白。抽提得到的細(xì)胞漿蛋白可以和步驟14C中抽提得到的細(xì)胞漿蛋白合并,。