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SABC(兔IgG)-FITC說(shuō)明書

貨號(hào):SA0023

 試劑盒組成:

1，  封閉液：10ml,，5%BSA

2,，  生物素化羊抗兔：濃縮液100ul。

3,，  SABC-FITC:濃縮液100ul。

4，  稀釋液：30ml,。

5，  抗熒光衰減封片劑

試劑盒簡(jiǎn)介：

本試劑盒適合于一抗為兔IgG的免疫組化實(shí)驗(yàn). FITC顯色,。

SABC是專為免疫組化和其他免疫檢測(cè)而設(shè)計(jì)的,，用以顯示組織和細(xì)胞中抗原分布。鏈霉親和素(StreptAvidin)是一種從鏈霉菌中提取的蛋白質(zhì)，同親和素一樣,，對(duì)生物素有*的親和力,，親和素是一個(gè)堿性蛋白質(zhì)（IP=10），經(jīng)改造后可以轉(zhuǎn)變成中性蛋白質(zhì),。鏈霉親和素等電點(diǎn)接近中性,，對(duì)組織和細(xì)胞的非特異吸附很低，基于鏈霉親和素的免疫組化方法背景很低,。SABC即StreptAvidin—Biotin Complex,。SABC大約可形成一百個(gè)左右的過(guò)氧化物酶和五十個(gè)左右的鏈霉親和素所構(gòu)成的復(fù)合物。大量的酶將保證SABC具有很高的敏感性,。

自備試劑：

1．粘片劑多聚賴氨酸,。

2． 0.01 M PBS（pH7.2-7.4）

3． 0.01M檸檬酸鈉緩沖液

4、抗熒光衰減封片劑

 實(shí)驗(yàn)步驟:

以石蠟切片熱修復(fù)為例

1. 切片常規(guī)脫蠟至水,。

2．熱修復(fù)抗原:將切片浸入0.01M 枸櫞酸鹽緩沖液（PH6.0）,電爐或微波爐加熱至沸騰后斷電,，間隔5-10分鐘后，反復(fù)1-2次,。冷卻后PBS（pH7.2-7.6）洗滌1-2次,。

3．滴加5%BSA封閉液,室溫20分鐘。甩去多余液體, 不洗,。

4．用稀釋液將一抗（如兔抗IL-10）按一定比例稀釋（稀釋后的一抗4℃可保存一周）,，也可另行購(gòu)買抗體稀釋液。滴加稀釋的一抗,，37 ℃ 1小時(shí)左右或20℃時(shí)2小時(shí)左右,。也可4℃過(guò)ye。PBS（pH7.2-7.4）洗2分鐘×3次,。（一抗的稀釋度,、孵育時(shí)間和溫度與染色強(qiáng)度、背景有直接關(guān)系,。一般來(lái)說(shuō),，陽(yáng)性染色強(qiáng)度不夠時(shí)，可提高一抗?jié)舛群脱娱L(zhǎng)孵育時(shí)間,；背景過(guò)高時(shí),，可降低一抗?jié)舛群涂s短孵育時(shí)間。）

5．根據(jù)使用量,用稀釋液將生物素化羊抗兔IgG濃縮液按1:100稀釋成工作液(1ml稀釋液加入10ul生物素化羊抗兔IgG濃縮液,混勻即成工作液,。此工作液4℃可保存一周).滴加生物素化羊抗兔IgG工作液,20-37℃ 30分鐘,。PBS（pH7.2-7.4）洗2分鐘×3次。

6．根據(jù)使用量,用稀釋液將SABC-FITC濃縮液按1:100稀釋成工作液(1ml稀釋液加入10ul SABC-FITC濃縮液,，混勻即成SABC-FITC工作液。此工作液4℃可保存一周).滴加SABC-FITC工作液,20-37℃，30分鐘(避光),。PBS（pH7.2-7.4）洗5分鐘×4次,。

7．滴加抗熒光衰減封片劑封片。熒光顯微鏡觀察,。

注意事項(xiàng)：如果染色背景過(guò)高,，在SABC反應(yīng)之后，用加有0.01—0.02% TWEEN-20的PBST（pH7.2-7.4）洗滌切片4次,，PBS洗2次,，然后封片觀察。