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Hoechst 33258,，也稱bisBenzimide H 33258或HOE 33258,。分子式為C₂₅H₂₄N₆O·3HCl，分子量為533.88,，CAS Number 23491-45-4,。
    Hoechst 33258是一種可以穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光染料，對(duì)細(xì)胞的毒性較低,。
    Hoechst 33258染色常用于細(xì)胞凋亡檢測(cè),，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細(xì)胞儀檢測(cè)。Hoechst 33258也常用于普通的細(xì)胞核染色,，或常規(guī)的DNA染色,。
    Hoechst 33258的zui大激發(fā)波長(zhǎng)為346nm,，zui大發(fā)射波長(zhǎng)為460nm；Hoechst 33258和雙鏈DNA結(jié)合后,，zui大激發(fā)波長(zhǎng)為352nm,，zui大發(fā)射波長(zhǎng)為461nm。
 

此染色液做成濃縮液和稀釋液主要是為了使用方便,，因?yàn)?span style="font-size:12pt">濃縮液才1ml,解凍起來(lái)很快,，實(shí)際也可以一次將濃縮液都加入稀釋液中，混勻使用,。但如果一次使用量比較少,，使用次數(shù)比較多，是適當(dāng)分裝一下,，免得多次凍融,。

使用說(shuō)明：
Hoechst 33258染色液染色液的配制：將Hoechst 33258濃縮液取出解凍，輕輕混勻,，短時(shí)間離心，根據(jù)使用量,，按照1ml33258稀釋液加入20ul33258濃縮液的比例配制,，即成Hoechst 33258染色液。此配好的染色液深度為10ug/ml,如果感覺(jué)染色顏色比較深,，可適當(dāng)?shù)南♂專ㄓ孟♂屢海?。此配好的染色液未用完可存放?20℃避光。
1. 對(duì)于固定的細(xì)胞或組織：
   a. 對(duì)于細(xì)胞或組織樣品,，固定后,，適當(dāng)洗滌去除固定劑。隨后如果需要進(jìn)行免疫熒光染色,，則先進(jìn)行免疫熒光染色,，染色完畢后再按后續(xù)步驟進(jìn)行Hoechst 33258染色。如果不需要進(jìn)行其它染色,，則直接進(jìn)行后續(xù)的Hoechst 33258染色,。
   b. 對(duì)于貼壁細(xì)胞或組織切片，加入少量,，覆蓋住樣品即可,。對(duì)于懸浮細(xì)胞，至少加入待染色樣品體積3倍的染色液,，混勻,。室溫放置3-5分鐘。
   c. 吸除,，用TBST,、PBS或生理鹽水洗滌2-3次,，每次3-5分鐘。
   d. 直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察,。細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí),，會(huì)看到凋亡細(xì)胞的細(xì)胞核呈致密濃染，或呈碎塊狀致密濃染,。
2. 對(duì)于活細(xì)胞或組織：
   a. 加入適當(dāng)量,，必須充分覆蓋住待染色的樣品，通常對(duì)于六孔板一個(gè)孔需加入1ml染色液,，對(duì)于96孔板一個(gè)孔需加入100微升染色液,。
   b. 在適宜于細(xì)胞培養(yǎng)的溫度培養(yǎng)20-30分鐘。棄染色液,，用PBS或培養(yǎng)液洗滌2-3次即可進(jìn)行熒光檢測(cè),。