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上海橋星貿(mào)易有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品： 進(jìn)口透析袋,密理博ECL發(fā)光液,B27無(wú)血清培養(yǎng)基,Gibco膠原酶 |
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| 參考價(jià) | ￥ 280 |
| 訂貨量 | 1 |
更新時(shí)間：2024-01-07 15:34:39瀏覽次數(shù)：1968
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福爾根(Feulgen)染色液說(shuō)明書
福爾根(Feulgen)染色液反應(yīng)原理：
DNA 經(jīng)酸（1mol/L HCl）水解后，嘌呤堿與脫氧核糖間的糖苷鍵被打開,，并且使脫氧核糖與磷酸間的磷酯鍵斷開,，在脫氧核糖的一端形成游離的醛基,。醛基在原位與 Schiff 試劑結(jié)合,，形成紫紅色化合物,，使細(xì)胞內(nèi)含有 DNA的部位呈紫紅色陽(yáng)性反應(yīng),。紫紅色的產(chǎn)生是因?yàn)榉磻?yīng)產(chǎn)物的分子內(nèi)有醌基（醌基是一個(gè)具有顏色的發(fā)色團(tuán)）,，所以含有 DNA 的部位,，呈紫紅色。而RNA用此法處理后則分解,。
試劑組成 | 規(guī)格 | 保存條件 |
Schiff試劑 | 100ml | 2-8℃避光 |
重亞硫酸鹽溶液 | 100ml | 2-8℃避光 |
保質(zhì)期：2-8℃避光6個(gè)月,。
福爾根(Feulgen)染色液操作步驟
本染色液采用經(jīng)典方法配制，染色方法可參考文獻(xiàn)或者實(shí)驗(yàn)室留傳下來(lái)的方法,，或者參考下面的方法,。
處理準(zhǔn)備標(biāo)本，同時(shí)準(zhǔn)備60℃的１Ｍ的鹽酸溶液,。
１．切片脫蠟入水(洋蔥表皮等類似標(biāo)本,，固定，梯度乙醇后入水),。
２．切片放入60℃的 1M的鹽酸溶液中約5-15分鐘(水解時(shí)間因標(biāo)本及固定液不同而有差異,，)。
３．滴加或者浸入Schiff試劑,，反應(yīng)30-60分鐘（此步為避光反正,，在通風(fēng)處，用完試劑請(qǐng)馬上蓋嚴(yán)）,。
４．吸干或者甩去Schiff試劑（如果不用重亞硫酸鹽溶液洗,，此步可直入水沖洗）
５．用重亞硫酸鹽溶液清洗,，用完蓋嚴(yán)（一般此步可省,，直接用蒸餾水洗）,。
６．在蒸餾水中充分沖洗。
7．封片（要保存染色結(jié)果,，請(qǐng)經(jīng)酒精脫水,，二甲苯透明并封片）。 如果只簡(jiǎn)單的立刻觀察,，可直接在有少量水的情況下壓片,。顯微鏡觀察。
福爾根(Feulgen)染色液注意事項(xiàng)
1．此試劑為接到訂單后我公司再配制,，保質(zhì)期一般為6個(gè)月,。但因?yàn)榻?jīng)常開蓋等原因造成SO2流失，試劑保質(zhì)期會(huì)變短,，如果染色結(jié)果不佳,，可適當(dāng)加入少量重亞硫酸鈉（鉀）,，加入量一般為0.1g/L
2．雖然Feulgen法是DNA的特異染色方法，但如果延長(zhǎng)水解時(shí)間并在室溫下進(jìn)行反應(yīng),， Schiff試劑也與醛,、酮、醇和縮醛磷脂起反應(yīng),，因此用Feulgen法檢測(cè)DNA時(shí)必須嚴(yán)格控制鹽酸水解的時(shí)間和溫度,。為減少假陽(yáng)性和非特異性染色必須做對(duì)照實(shí)驗(yàn)。
３．由于Schiff試劑能與醛基結(jié)合,，故不能用含醛的固定液固定組織,，常用Carnoy固定液。Bouin液不適用于Feulgen反應(yīng),，因?yàn)楣潭ㄒ褐泻^多的酸,，可將DNA水解，影響染色反應(yīng),。
