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上海橋星貿(mào)易有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品： 進(jìn)口透析袋,密理博ECL發(fā)光液,B27無(wú)血清培養(yǎng)基,Gibco膠原酶 |
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2016-2-23 閱讀(1055)
| 提 供 商 | 上海橋星貿(mào)易有限公司 | 資料大小 | 20.2KB |
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| 資料圖片 | 下載次數(shù) | 104次 | |
| 資料類型 | PNG 圖片 | 瀏覽次數(shù) | 1055次 |
上海橋星Invitrogen原裝Trizol現(xiàn)貨
TRIZOL簡(jiǎn)介：
TRIzol是一種新型總RNA抽提試劑，可以直接從細(xì)胞或組織中提取總RNA,。其含有苯酚,、異硫氰酸胍等物質(zhì)，能迅速破碎細(xì)胞并抑制細(xì)胞釋放出的核酸酶,。
TRIzol在破碎和溶解細(xì)胞時(shí)能保持RNA的完整性,，因此對(duì)純化DNA及標(biāo)準(zhǔn)化RNA的生產(chǎn)十分有用。
TRIzol的成分
TRIzol的主要成分是苯酚,。苯酚的主要作用是裂解細(xì)胞,，使細(xì)胞中的蛋白，核酸物質(zhì)解聚得到釋放,。苯酚雖可有效地變性蛋白質(zhì),，但不能*抑制RNA酶活性,，因此TRIzol中還加入了8－羥基喹啉、異硫氰酸胍,、β-巰基乙醇等來(lái)抑制內(nèi)源和外源RNase（RNA酶）,。
※0.1%的8－羥基喹啉可以抑制RNase，與氯仿聯(lián)合使用可增強(qiáng)抑制作用,。
※異硫氰酸胍屬于解偶劑,，是一類強(qiáng)力的蛋白質(zhì)變性劑，可溶解蛋白質(zhì)并使蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)消失,，導(dǎo)致細(xì)胞結(jié)構(gòu)降解,，核蛋白迅速與核酸分離。
※β-巰基乙醇的主要作用是破壞RNase蛋白質(zhì)中的二硫鍵,。
TRIzol的使用方法
用勻漿器將組織磨碎,，加入TRIzol處理組織。5分鐘后加入氯仿,，以每分鐘12000轉(zhuǎn)離心5分鐘,，樣品即分成水樣層、中間層和有機(jī)層,。
※RNA存在于水樣層中,，收集水樣層后可以通過(guò)異丙醇沉淀RNA來(lái)還原。
※在除去水樣層后,，有機(jī)層中的DNA和蛋白質(zhì)也能相繼以沉淀的方式還原：乙醇能使中間層的DNA沉淀析出,，在有機(jī)層中加入異丙醇能沉淀出蛋白質(zhì)。
每100ml TRIzol可以抽提100個(gè)六孔板中的樣品或100個(gè)50-80mg的組織樣品,。無(wú)論樣品是人,、動(dòng)物、植物還是細(xì)菌組織,，該方法對(duì)少量的組織（50-100mg）和細(xì)胞（約五百萬(wàn)個(gè)）及大量的組織（≥1g）和細(xì)胞（超過(guò)一千萬(wàn)個(gè)）均有較好的分離效果,。
每一百萬(wàn)細(xì)胞用TRIzol抽提可得5-15微克RNA，每毫克組織用TRIzol抽提可得1-10微克RNA（產(chǎn)量因細(xì)胞和組織不同而異）,。
TRIzol操作上的簡(jiǎn)便性允許其同時(shí)處理多個(gè)樣品,，所有的操作可以在一小時(shí)內(nèi)完成,。
TRIzol抽提的總RNA能夠避免DNA和蛋白質(zhì)的污染,，故而能夠作RNA 印跡分析、斑點(diǎn)雜交,、poly（A）+ 選擇,、體外翻譯、RNA酶保護(hù)分析和單分子克?。≒CR）,。
※如果是用于PCR,，當(dāng)兩條引物位于單一外顯子內(nèi)時(shí)，建議用級(jí)聯(lián)擴(kuò)大的DNase I（Cat. No. 18068）來(lái)處理抽提的總RNA,。
※TRIzol試劑能促進(jìn)不同種屬,、不同分子量大小的多種RNA的析出。例如,，從大鼠肝臟抽提的RNA經(jīng)過(guò)瓊脂糖凝膠電泳并用溴化乙啶染色,，可見(jiàn)許多介于7kb和15kb之間的不連續(xù)的高分子量條帶（mRNA和hnRNA成分），兩條優(yōu)勢(shì)核糖體RNA條帶位于~5 kb （28S）和~2 kb （18S）,，低分子量RNA介于0.1和0.3kb之間 （tRNA, 5S）,。當(dāng)抽提的RNA用TE稀釋時(shí)，其A260/A280比值≥1.8,。抽提小RNA時(shí)宜-70℃沉淀,。
TRIzol對(duì)人體有害，使用時(shí)應(yīng)戴一次性手套,，注意防止濺出,。
