 |
上海橋星貿(mào)易有限公司
主營產(chǎn)品： 進口透析袋,密理博ECL發(fā)光液,B27無血清培養(yǎng)基,Gibco膠原酶 |
11
聯(lián)系電話
|
上海橋星貿(mào)易有限公司
主營產(chǎn)品： 進口透析袋,密理博ECL發(fā)光液,B27無血清培養(yǎng)基,Gibco膠原酶 |
聯(lián)系電話
2023-8-16 閱讀(1140)
SF9(昆蟲卵巢細胞)細胞培養(yǎng)教程
常 見 問 題 及 解 決 方 案
Q1. 細胞密度怎么計算的？
嚴格意義上,，細胞密度需要收集細胞懸液計數(shù)細胞數(shù)量,，但在實際培養(yǎng)過程中，并不需要為了精確控制細胞數(shù)量而消化細胞計數(shù),。因此,，常用的細胞密度指細胞相對于最大生長密度的比值，貼壁細胞可以粗略的用細胞所占培養(yǎng)容器底面積百分比表示,，即顯微鏡下觀察培養(yǎng)容器底部,，有細胞的區(qū)域占總區(qū)域的百分比值，當然這種表達方式受限于單個細胞生長不同密度時所占面積不同導致并不嚴謹,，但也是相當直觀,、簡便的表現(xiàn)細胞狀態(tài)的一種方式；
Q2. 培養(yǎng)過程中細胞碎片較多怎么處理,？
1.細胞內(nèi)的黑色顆粒是細胞外分泌泡及細胞器折光,，這個屬于細胞自身特性，無法清除也無法改變,，大部分細胞都會有這種現(xiàn)象,，只是不同細胞顆粒多少有區(qū)別，細胞培養(yǎng)體系不適應,、營養(yǎng)缺乏,、滲透壓異常等均可能導致細胞內(nèi)顆粒增加，建議使用合適的培養(yǎng)條件,。
2. 細胞外的黑色顆粒大部分是細胞碎片和細胞代謝產(chǎn)物,，可以先吸走培養(yǎng)基后用PBS潤洗清除,，再加新的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。潤洗不能清除的可以換液清洗后等細胞密度70-80%左右消化處理細胞,，消化完成后加培養(yǎng)基終止消化,，混勻細胞，收集細胞懸液900-1000rpm(約150g)離心3min,，棄上清,。再加5ml PBS重懸細胞，再離心后,，用培養(yǎng)基重懸接種到新的培養(yǎng)皿,。第二次PBS重懸是為了去除碎片，如果平時碎片比較少,，傳代時可以省略PBS重懸的步驟,；如果碎片很多，建議PBS多洗幾次,。
Q3. 懸浮培養(yǎng)需要怎么操作,？
本公司SF9細胞自適應懸浮培養(yǎng)，基本無需訓化,。 需要懸浮培養(yǎng)前需保證細胞活性90%以上,，收集細胞懸液，以1x107細胞/ml的密度接種至搖瓶中培養(yǎng)即可,。搖瓶培養(yǎng)轉速跟實際條件相關,，尚恩使用轉速約100rpm/min，客戶可以根據(jù)自身實驗室情況選擇合適的轉速（通常80-150rpm之間）,。
| 樂樂品牌代理情況 | |
| Viskase聯(lián)合碳化 | 透析袋 |
| Spectrumlabs仕必純 | 透析袋,、透析膜片、透析柱,、透析袋夾子,、濃縮劑、中空纖維管,、組織粉碎器,、采樣管、移植管,、離子交換樹脂 |
| Mei5bio聚合美 | 分子生物學：PCR、qPCR,、RTPCR,、超保真PCR、DNA電泳純化,、克隆,、點突變 |
| SPL | 全線耗材：細胞培養(yǎng),、發(fā)光分析、微生物學,、冷凍儲存 |
| Solarbio索萊寶 | 全線產(chǎn)品以自營品牌為主 |
| Psaitong普西唐 | 全線產(chǎn)品：生命科學,、化合物庫、精細化學,、分析化學 |
| Macklin麥克林 | 全線產(chǎn)品,，多年代理 |
| Liofilchem利飛馳 | 藥敏紙片、藥敏紙條 |
| Chroamagar科馬嘉 | 顯色培養(yǎng)基 |
| HW杭州微生物 | 干粉培養(yǎng)基,、生化鑒定管,、藥敏紙片、培養(yǎng)基原料 |
| Fuheng富衡 | 細胞系,、細胞房消殺抑菌產(chǎn)品 |
| Bioexplorer百澳樂 | 細胞培養(yǎng)基,、進口免分裝胎牛血清、胰酶雙抗平衡鹽,，細胞轉染 |
| Cellmax賽澳美 | 國產(chǎn)胎牛血清,，特殊血清，胰酶雙抗,，細胞培養(yǎng)添加劑 |
| 鄭州盈圣 | 國產(chǎn)動物血清,、動物全血，尤其適合工業(yè) |
| MCE | 全線產(chǎn)品：信號通路,、染料,、多肽、蛋白,、天然產(chǎn)物,、抑制劑、化合物庫,、試劑盒 |
| Smartbuffers | 各種干粉速溶顆粒緩沖液沖劑,、片劑，特色產(chǎn)品訂制 |
| 美基 | RNA/DNA核酸提取 |
| 雅酶【不允許上平臺】 | WB產(chǎn)品 |
| 美國Formumax | 氯氟松,，巨噬細胞去除劑 |
