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抗體保存知多少
閱讀：813 發(fā)布時(shí)間：2015-12-30
通常情況下，抗體經(jīng)恰當(dāng)保存和處理，大多數(shù)應(yīng)能保持活性數(shù)月乃至數(shù)年。當(dāng)然,，不同類型抗體，其保存的方法也可能不一樣,，以下就抗體的保存,，提供一些參考!
一、保存溫度和條件
對(duì)于很多抗體而言,，保存在-20℃是*足夠了,，沒有任何證據(jù)顯示保存在-80℃會(huì)有更多的好處!分裝成小等份可zui大程度減少由凍融造成的損傷,，以及從單個(gè)試劑瓶中多次吸取而引入的污染,。小等份只需凍融一次，如有剩余,，可將剩余物保存于 4oC. 在收到抗體時(shí),，在 10,000 × g 下離心 20 秒以沉積截留于試劑瓶螺紋的溶液，并以小等份轉(zhuǎn)移至低蛋白結(jié)合微量離心管中,。小等份的量取決于實(shí)驗(yàn)人員在實(shí)驗(yàn)中通常采用的量,。小等份應(yīng)不小于10 µl; 等份越小，儲(chǔ)液濃度因抗體蒸發(fā)及吸附于保存瓶表面而受到的影響越大,。
在大多數(shù)情況下,，收到抗體時(shí)在 4oC 下保存一至兩周，然后再冷凍進(jìn)行長(zhǎng)期保存是可接受的,，但也許腹水液是例外,，它可能包含蛋白酶，因而應(yīng)該盡快凍存,。同樣,，遵照說(shuō)明書上的建議是重要的。
大部分抗體的運(yùn)輸條件：一般的運(yùn)輸過(guò)程需要1-2周的時(shí)間，所以是在4℃的條件下來(lái)完成的,。
對(duì)于特殊的抗體,，如酶、熒光素等偶聯(lián)抗體,、IgG3同型抗體等抗體的保存有其注意事項(xiàng)：
1,、偶聯(lián)抗體 酶偶聯(lián)抗體不應(yīng)凍存，而應(yīng)保存于 4oC. 凍融不僅影響抗體結(jié)合能力,，還會(huì)降低酶活性,。無(wú)論偶聯(lián)至熒光染料、酶還是生物素,，偶聯(lián)抗體都應(yīng)保存于深色試劑瓶中或用金屬箔包裹. 暴露于光線中將損害偶聯(lián)物的活性,。特別是熒光偶聯(lián)物易受到光漂白影響，在實(shí)驗(yàn)的所有階段都應(yīng)避光,。
2,、IgG3的同型對(duì)照 保存在4℃，避免凍起來(lái),。因?yàn)槿绻霈F(xiàn)凍融過(guò)程,，該抗體非常容易形成多聚體
二、用*防止污染
為了防止微生物污染,，可將*加入抗體制備品中達(dá)到0.02% (w/v). 的終濃度,。但是有時(shí)不能使用*，有以下兩中情形：
(1),、如果用抗體染色或處理活細(xì)胞,，或如果用抗體進(jìn)行體內(nèi)研究，一定要使用不包含*的制備品,。該抗菌劑也對(duì)大多數(shù)其它生物具有毒性：它阻斷細(xì)胞色素電子傳遞系統(tǒng),。
(2)、*會(huì)干擾氨基參與的任何偶聯(lián),，應(yīng)在偶聯(lián)進(jìn)行前除去,。偶聯(lián)后，
抗體可保存于*中,，除此以外,，0.01% 硫汞撒(硫柳汞)不含伯胺，也是可接受的替代物,。
*可通過(guò)透析或凝膠過(guò)濾從抗體溶液中除去,。IgG 的分子量為 150,000 道爾頓(IgM 為約 600,000);*的分子量為 65 道爾頓。截留分子量為 14,000 道爾頓的微透析裝置可保留抗體同時(shí)使疊氮化物向外擴(kuò)散,。在保持于 4oC 的磁性攪拌器上的燒杯中,，每毫升抗體使用至少一升冷 PBS 并攪拌透析裝置 6 小時(shí),。更換 PBS 兩次，每次更換攪拌至少 6 小時(shí),。如有可能,，所有材料都應(yīng)滅菌并且所得的制備物應(yīng)無(wú)菌操作。
三,、冷凍/融化損傷
重復(fù)冷凍/融化循環(huán)可使抗體變性,，導(dǎo)致其形成使抗體結(jié)合能力降低的聚集物。保存于 -20oC 對(duì)于大多數(shù)抗體是適當(dāng)?shù)?保存于 -80oC 無(wú)明顯優(yōu)勢(shì),。冰箱不能為無(wú)霜型,。 這些冷凍和融化之間的循環(huán)(以減少結(jié)霜)恰恰是應(yīng)該避免的。出于相同原因,，抗體試劑瓶應(yīng)置于具有zui小溫度波動(dòng)的冰箱區(qū)域,，例如朝冰箱后部放置而不是置于門架上。
有些研究人員加入冷凍保護(hù)劑甘油達(dá)到 50% 的終濃度以防止冷凍/融化損傷;甘油可將凝固點(diǎn)降低至低于 -20oC,。雖然這對(duì)于很多抗體是可接受的,，但還是不能確保在該保存條件下的穩(wěn)定性，通常我們參考具體產(chǎn)品說(shuō)明書提供的保存方法,。在這里,，我們也一般不建議將包含甘油的溶液保存于 -80oC，因?yàn)樵摐囟鹊陀诟视偷哪厅c(diǎn),。還要注意甘油可被細(xì)菌污染,。如果加入甘油或任何冷凍保護(hù)劑，則應(yīng)當(dāng)小心操作,，以得到無(wú)菌制備物,。
應(yīng)避免抗體在稀釋至工作濃度后在 4℃ 下保存超過(guò)一天。蛋白質(zhì)在高濃度下保存時(shí)一般不易降解,，理想的濃度為 1 mg/ml 或更高,。這是在抗體溶液中加入蛋白質(zhì)例如 BSA 作為穩(wěn)定劑的理論基礎(chǔ),。加入的蛋白質(zhì)也有助于減少抗體因結(jié)合于容器壁上而造成的損失,。對(duì)于打算進(jìn)行偶聯(lián)的抗體而言，由于穩(wěn)定蛋白質(zhì)會(huì)與抗體競(jìng)爭(zhēng),，降低了偶聯(lián)的效率,，所以不應(yīng)加入穩(wěn)定蛋白質(zhì)。
一、保存溫度和條件
對(duì)于很多抗體而言,，保存在-20℃是*足夠了,，沒有任何證據(jù)顯示保存在-80℃會(huì)有更多的好處!分裝成小等份可zui大程度減少由凍融造成的損傷,，以及從單個(gè)試劑瓶中多次吸取而引入的污染,。小等份只需凍融一次，如有剩余,，可將剩余物保存于 4oC. 在收到抗體時(shí),，在 10,000 × g 下離心 20 秒以沉積截留于試劑瓶螺紋的溶液，并以小等份轉(zhuǎn)移至低蛋白結(jié)合微量離心管中,。小等份的量取決于實(shí)驗(yàn)人員在實(shí)驗(yàn)中通常采用的量,。小等份應(yīng)不小于10 µl; 等份越小，儲(chǔ)液濃度因抗體蒸發(fā)及吸附于保存瓶表面而受到的影響越大,。
在大多數(shù)情況下,，收到抗體時(shí)在 4oC 下保存一至兩周，然后再冷凍進(jìn)行長(zhǎng)期保存是可接受的,，但也許腹水液是例外,，它可能包含蛋白酶，因而應(yīng)該盡快凍存,。同樣,，遵照說(shuō)明書上的建議是重要的。
大部分抗體的運(yùn)輸條件：一般的運(yùn)輸過(guò)程需要1-2周的時(shí)間，所以是在4℃的條件下來(lái)完成的,。
對(duì)于特殊的抗體,，如酶、熒光素等偶聯(lián)抗體,、IgG3同型抗體等抗體的保存有其注意事項(xiàng)：
1,、偶聯(lián)抗體 酶偶聯(lián)抗體不應(yīng)凍存，而應(yīng)保存于 4oC. 凍融不僅影響抗體結(jié)合能力,，還會(huì)降低酶活性,。無(wú)論偶聯(lián)至熒光染料、酶還是生物素,，偶聯(lián)抗體都應(yīng)保存于深色試劑瓶中或用金屬箔包裹. 暴露于光線中將損害偶聯(lián)物的活性,。特別是熒光偶聯(lián)物易受到光漂白影響，在實(shí)驗(yàn)的所有階段都應(yīng)避光,。
2,、IgG3的同型對(duì)照 保存在4℃，避免凍起來(lái),。因?yàn)槿绻霈F(xiàn)凍融過(guò)程,，該抗體非常容易形成多聚體
二、用*防止污染
為了防止微生物污染,，可將*加入抗體制備品中達(dá)到0.02% (w/v). 的終濃度,。但是有時(shí)不能使用*，有以下兩中情形：
(1),、如果用抗體染色或處理活細(xì)胞,，或如果用抗體進(jìn)行體內(nèi)研究，一定要使用不包含*的制備品,。該抗菌劑也對(duì)大多數(shù)其它生物具有毒性：它阻斷細(xì)胞色素電子傳遞系統(tǒng),。
(2)、*會(huì)干擾氨基參與的任何偶聯(lián),，應(yīng)在偶聯(lián)進(jìn)行前除去,。偶聯(lián)后，
抗體可保存于*中,，除此以外,，0.01% 硫汞撒(硫柳汞)不含伯胺，也是可接受的替代物,。
*可通過(guò)透析或凝膠過(guò)濾從抗體溶液中除去,。IgG 的分子量為 150,000 道爾頓(IgM 為約 600,000);*的分子量為 65 道爾頓。截留分子量為 14,000 道爾頓的微透析裝置可保留抗體同時(shí)使疊氮化物向外擴(kuò)散,。在保持于 4oC 的磁性攪拌器上的燒杯中,，每毫升抗體使用至少一升冷 PBS 并攪拌透析裝置 6 小時(shí),。更換 PBS 兩次，每次更換攪拌至少 6 小時(shí),。如有可能,，所有材料都應(yīng)滅菌并且所得的制備物應(yīng)無(wú)菌操作。
三,、冷凍/融化損傷
重復(fù)冷凍/融化循環(huán)可使抗體變性,，導(dǎo)致其形成使抗體結(jié)合能力降低的聚集物。保存于 -20oC 對(duì)于大多數(shù)抗體是適當(dāng)?shù)?保存于 -80oC 無(wú)明顯優(yōu)勢(shì),。冰箱不能為無(wú)霜型,。 這些冷凍和融化之間的循環(huán)(以減少結(jié)霜)恰恰是應(yīng)該避免的。出于相同原因,，抗體試劑瓶應(yīng)置于具有zui小溫度波動(dòng)的冰箱區(qū)域,，例如朝冰箱后部放置而不是置于門架上。
有些研究人員加入冷凍保護(hù)劑甘油達(dá)到 50% 的終濃度以防止冷凍/融化損傷;甘油可將凝固點(diǎn)降低至低于 -20oC,。雖然這對(duì)于很多抗體是可接受的,，但還是不能確保在該保存條件下的穩(wěn)定性，通常我們參考具體產(chǎn)品說(shuō)明書提供的保存方法,。在這里,，我們也一般不建議將包含甘油的溶液保存于 -80oC，因?yàn)樵摐囟鹊陀诟视偷哪厅c(diǎn),。還要注意甘油可被細(xì)菌污染,。如果加入甘油或任何冷凍保護(hù)劑，則應(yīng)當(dāng)小心操作,，以得到無(wú)菌制備物,。
應(yīng)避免抗體在稀釋至工作濃度后在 4℃ 下保存超過(guò)一天。蛋白質(zhì)在高濃度下保存時(shí)一般不易降解,，理想的濃度為 1 mg/ml 或更高,。這是在抗體溶液中加入蛋白質(zhì)例如 BSA 作為穩(wěn)定劑的理論基礎(chǔ),。加入的蛋白質(zhì)也有助于減少抗體因結(jié)合于容器壁上而造成的損失,。對(duì)于打算進(jìn)行偶聯(lián)的抗體而言，由于穩(wěn)定蛋白質(zhì)會(huì)與抗體競(jìng)爭(zhēng),，降低了偶聯(lián)的效率,，所以不應(yīng)加入穩(wěn)定蛋白質(zhì)。