Corning® NK細胞活化擴增培養(yǎng)套裝

NK細胞是當今免疫-治療常用的細胞。但是NK細胞培養(yǎng)操作難度大,，對培養(yǎng)條件,、培養(yǎng)技術要求很高，難以獲得高純度高效能的活性細胞,。 Corning NK細胞活化擴增培養(yǎng)基套裝由多個組分組成,，為 NK細胞培養(yǎng)提供簡便的操作方案。使用該套裝所獲得細胞數(shù)量產量高,，活性高,，具有很高的殺傷效應。

Corning® NK細胞活化/擴增培養(yǎng)套裝

英文名：Corning® NK Expansion Kit

中文名：Corning® NK細胞活化擴增培養(yǎng)套裝

應用：NK細胞活化擴增

品牌產地：美國Corning

保存：2°C - 8°C

貨號：88-570-kit

產品組成

NK細胞活化培養(yǎng)基

NK細胞活化添加劑

NK細胞擴增培養(yǎng)基

抗體預包被T75細胞培養(yǎng)瓶

細胞培養(yǎng)袋

產品特色

擴增能力強,，在14天內可達到100倍擴增

效應細胞比例高,，可達80％

操作方便

產品訂購信息

華雅再生醫(yī)學旗艦公司：紅榮微再（上海）生物工程技術有限公司授權代理Corning免疫細胞治療產品,。紅榮微再以“傳遞科學價值，服務科學研究"為宗旨,，主營干細胞,、精準醫(yī)療、細胞治療,、器官再生四大板塊的產品,。

：  ：150、210,、10459,。紅榮微再-客服:  經銷商專員

Corning® NK細胞活化擴增培養(yǎng)套裝

Corning® NK細胞活化擴增培養(yǎng)套裝性能

圖1. NK細胞在Corning培養(yǎng)基中能夠得到更有效的擴增

圖2. Corning培養(yǎng)基中獲得的NK細胞具有更高的細胞毒性

健康人的PBMC細胞接種數(shù)量為3x10⁷ ，根據(jù)廠家建議進行細胞培養(yǎng),。使用Corning培養(yǎng)基時,，0-5天使用NK活化培養(yǎng)基 (Primary Medium)，6-14天使用NK 擴增培養(yǎng)基 (NK Expansion Medium )添加1000 IU/mL IL-2 進行培養(yǎng),。細胞培養(yǎng)至14天收獲,，進行細胞計數(shù)和腫瘤殺傷能力檢測。腫瘤殺傷實驗

使用的靶細胞為K562細胞,。

圖３. Corning培養(yǎng)基中獲得的NK細胞具有更高的CD3-CD56+陽性率 (83.0% vs 67.6%),。

健康人的PBMC細胞根據(jù)廠家建議進行細胞培養(yǎng)。細胞培養(yǎng)至14天收獲,，進行細胞計數(shù)和檢測,。細胞使用CD3 FITC /CD56 PE進行染色，之后使用BD AccuriTM C6 flow cytometer進行檢測,。

Corning® NK細胞活化擴增培養(yǎng)套裝使用方法

NK 細胞擴增和活化

1. 抗凝血室溫離心,，400 xg，10min,，上層血漿轉移到新管,。

2. 熱滅活自體血漿，56°C,，30min,。離心， 800 xg ,， 20 min,，去除沉淀。4°C 保存上清血漿,，培養(yǎng)備用,。

3. 加入等體積PBS（不含鈣鎂）替代被移除血漿保持體積不變，小心重懸血細胞,。

注意：PBS預加0.1%人血清白蛋白（HSA）利于保持血細胞活性,。

4. 使用淋巴細胞分離液從上面的血樣中制備PBMCs（人外周血單個核細胞）,。

注意：使用新鮮采集的人血（2h內采集）有利培養(yǎng)，不要使用超過24h的血樣,。

5.  至少5倍體積的PBS（不含鈣鎂）清洗PBMCs,。室溫離心500xg，10min,，收集PBMCs,。

6.  PBMCs稀釋到 1 x 10⁶ cells/mL，使用NK活化培養(yǎng)基配比1.8mL NK活化添加劑和10%自體血漿,。

7.  預包被T-75培養(yǎng)瓶使用前,，用PBS（不含鈣鎂）清洗兩次。

8.  添加30 mL PBMC懸液到預包被T-75培養(yǎng)瓶,，37°C,，5% CO2培養(yǎng)。

注意：第六天之前,，如果培養(yǎng)基變黃,，細胞密度超過2.0 x 10⁶ cells/mL，需要添加新鮮的NK活化培養(yǎng)基配比10%自體血漿,，保持細胞密度大于 5 x 10⁵ cells/mL,。

9.  培養(yǎng)第六天，培養(yǎng)液離心,，適量NK擴增培養(yǎng)基（1000 IU/mL IL-2 和10%自體血漿）重懸細胞，再轉移到T-225培養(yǎng)瓶或透氣細胞培養(yǎng)袋,。

10.  每隔兩三天,，根據(jù)細胞擴增狀態(tài)，培養(yǎng)體系中添加新鮮的NK擴增培養(yǎng)基（1000 IU/mL IL-2 和10%自體血漿）保持細胞密度在5 x 10⁵到 2.0 x 10⁶ cells/mL之間,。

注意：NK擴增階段,，所加新鮮培養(yǎng)基自體血漿含量推薦范圍：0.5%-1%。

11.  培養(yǎng)14天左右,，收獲NK細胞,。

注意：整個實驗過程中，細胞懸液吹打和培養(yǎng)容器拍打都要輕柔,，以避免細胞損傷,，保持細胞活性。

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