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Cellex natural killer cell kit protocol
使用流程：
1,， PBMC的分離：
a) 準(zhǔn)備一支含20ml Ficoll的離心管，將30ml抗凝血（為肝素抗凝的外周血）直接加入管中,，800G,，升速1,降速1,離心15min；
b) 離心后,，將血漿吸出移入另一個(gè)50ml離心管中（約15-20ml）,，將白膜層吸出移入兩個(gè)15ml離心管中,，補(bǔ)充PBS，離心800G,，9min,；
血漿56℃滅活25min，然后離心3000rpm,，3min,，待用；
c) 離心后,，棄上清,，用 PBS重懸細(xì)胞，將細(xì)胞吹勻后離心,，400G,，9min；洗滌2次,；
d) 用10ml NKGM（I/Kit）重懸細(xì)胞沉淀,，計(jì)數(shù)待用。
注：分離PBMC時(shí)應(yīng)注意觀察血小板是否分離干凈,，如去不凈可用培養(yǎng)基（NKGM）多洗一次,。
2， 刺激活化PBMC步驟
注：整個(gè)培養(yǎng)流程中,，細(xì)胞應(yīng)處于較為靜止的狀態(tài),，除加液和轉(zhuǎn)移等必須步驟，應(yīng)避免劇烈吹打和震蕩細(xì)胞,。
a) day0,，用20ml PBS輕柔清洗初始NK細(xì)胞培養(yǎng)袋（K/Kit）兩次；按照下列表格定容,，然后用50ml注射器注入初始培養(yǎng)袋中,；使用注射器,將培養(yǎng)袋中空氣抽凈，防止培養(yǎng)袋中有較大的氣泡存留,；培養(yǎng)袋做好標(biāo)記,，放入37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。

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Serial
產(chǎn)品名稱
公司/品牌
貨號(hào)
描述
規(guī)格
1
natural killer cell culture kit
Cellex
17510500
NK細(xì)胞初期培養(yǎng)袋 (K/Kit)
10ml
Cellex
16087585
NK細(xì)胞培養(yǎng)基 (I/Kit)
1000ml
Cellex
16087583
NK細(xì)胞培養(yǎng)基-培養(yǎng)袋 (T/Kit)
2 x 1000ml

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