細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)是指將外源分子如DNA,，RNA等導(dǎo)入真核細(xì)胞的技術(shù),。隨著分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)研究的不斷發(fā)展，轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為研究和控制真核細(xì)胞基因功能的常規(guī)工具,。在研究基因功能、調(diào)控基因表達(dá),、突變分析和蛋白質(zhì)生產(chǎn)等生物學(xué)試驗(yàn)中,，其應(yīng)用越來(lái)越廣泛。影響轉(zhuǎn)染效率的因素有很多,細(xì)胞株本身的特性和活性,，細(xì)胞培養(yǎng)條件,轉(zhuǎn)染的DNA或RNA的質(zhì)量,，轉(zhuǎn)染方法，轉(zhuǎn)染試劑的選擇等,。
轉(zhuǎn)染效率受多種因素影響,，主要因素有下面幾個(gè):
1．轉(zhuǎn)染試劑
不同細(xì)胞系轉(zhuǎn)染效率通常不同，但細(xì)胞系的選擇通常是根據(jù)實(shí)驗(yàn)的需要,，因此在轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)前應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求和細(xì)胞特性選擇適合的轉(zhuǎn)染試劑,。當(dāng)然，zui shi he的是高效,、低毒,、方便、廉價(jià)的轉(zhuǎn)染試劑,。
2．細(xì)胞狀態(tài)
一般低的細(xì)胞代數(shù)（<50）能確?；蛐筒蛔儭ui shi he轉(zhuǎn)染的細(xì)胞是經(jīng)過(guò)幾次傳代后達(dá)到指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,，細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛,，最容易轉(zhuǎn)染。細(xì)胞培養(yǎng)在實(shí)驗(yàn)室中保存數(shù)月和數(shù)年后會(huì)經(jīng)歷突變,，總?cè)旧w重組或基因調(diào)控變化等而演化,。
3．轉(zhuǎn)染方法
轉(zhuǎn)染時(shí)應(yīng)跟據(jù)具體轉(zhuǎn)染試劑推薦的方法，但也要注意,，因不同實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的細(xì)胞性質(zhì)不同,，質(zhì)粒定量差異，操作手法上的差異等,，其轉(zhuǎn)染效果可能不同,，應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)室的具體條件來(lái)確定最佳轉(zhuǎn)染條件,。
(1）細(xì)胞培養(yǎng)物
不同細(xì)胞有不同的培養(yǎng)基，血清和添加物,。高的轉(zhuǎn)染效率需要一定的細(xì)胞密度,，一般的轉(zhuǎn)染試劑都會(huì)有專門的說(shuō)明。推薦在轉(zhuǎn)染前24小時(shí)分細(xì)胞,，這將提供正常細(xì)胞代謝,，增加對(duì)外源DNA攝入的可能。一定要避免細(xì)菌,，支原體或真菌的污染,。
(2）細(xì)胞密度
不同的轉(zhuǎn)染試劑，要求轉(zhuǎn)染時(shí)的最適細(xì)胞密度各不相同,，即使同一種試劑,，也會(huì)因不同的細(xì)胞類型或應(yīng)用而異。因此如果選用新的細(xì)胞系或者新的轉(zhuǎn)染試劑,，最好能夠進(jìn)行優(yōu)化實(shí)驗(yàn)并為以后的實(shí)驗(yàn)建立一個(gè)穩(wěn)定方法,包括適當(dāng)?shù)慕臃N量和培養(yǎng)時(shí)間等等,。陽(yáng)離子脂質(zhì)體具有微量的細(xì)胞毒性而往往需要更高的鋪板密度或者更多的懸浮細(xì)胞數(shù)，有的要求細(xì)胞90%匯片;而有些多胺或者非脂質(zhì)體的配方則要求在40%-80%之間,，總之是盡導(dǎo)致和轉(zhuǎn)染相關(guān)的細(xì)胞行為的變化,。
(3）血清
轉(zhuǎn)染產(chǎn)品配方幾經(jīng)革新后的今天，對(duì)于主流的轉(zhuǎn)染試劑來(lái)說(shuō),，血清的存在已經(jīng)不會(huì)影響轉(zhuǎn)染效率,，甚至還有助于提高轉(zhuǎn)染效率，如陽(yáng)離子聚合物等,，血清的存在會(huì)影響DNA一轉(zhuǎn)染復(fù)合物的形成,但只要在DNA-轉(zhuǎn)染復(fù)合物形成時(shí)用無(wú)血清培養(yǎng)基或PBS來(lái)稀釋DNA和轉(zhuǎn)染試劑就可以了,，在轉(zhuǎn)染過(guò)程中是可以使用血清的。不過(guò)要特別注意:對(duì)于RNA轉(zhuǎn)染,，如何消除血清中潛在的RNase污染是值得關(guān)注的,。胎牛血清（FCS）經(jīng)常用到，便宜一點(diǎn)的有馬或牛血清,。
(4）抗生素
目前轉(zhuǎn)染試劑因?yàn)槿潭伎梢杂糜醒搴涂股氐忍砑觿┑?培養(yǎng)基來(lái)操作,，非常方便，省去了污染等麻煩,。
(5)氮磷（N/P)比
N/P比是轉(zhuǎn)染效率的關(guān)鍵（為了換算方便,，一般以DNA/轉(zhuǎn)染試劑質(zhì)量比表示)，在一定比例范圍內(nèi)轉(zhuǎn)染效率隨N/P比成比例增高,，之后達(dá)到平值,，但毒性也隨之而增加，因此在實(shí)驗(yàn)之前應(yīng)根據(jù)推薦比例，確定本實(shí)驗(yàn)的最佳轉(zhuǎn)染比例,。
(6）DNA質(zhì)量
DNA質(zhì)量對(duì)轉(zhuǎn)染效率影響非常大,。一般的轉(zhuǎn)染技術(shù)(如脂質(zhì)體等)基于電荷吸引原理，如果DNA不純,，如帶少量的鹽離子,，蛋白，代謝物污染都會(huì)顯著影響轉(zhuǎn)染復(fù)合物的有效形成及轉(zhuǎn)染的進(jìn)行,。
4．載體構(gòu)建
轉(zhuǎn)染載體的構(gòu)建（病毒載體,，質(zhì)粒.DNA，RNA,，PCR產(chǎn)物,，寡核苷酸等）也影響轉(zhuǎn)染結(jié)果。病毒載體對(duì)特定宿主細(xì)胞感染效率較高,，但不同病毒載體有其特定的宿主,，有的還要求特定的細(xì)胞周期，如逆轉(zhuǎn)錄病毒需侵染分裂期的宿主細(xì)胞,，此外還需考慮一些安全問(wèn)題（如基因污染)。除載體構(gòu)建外,，載體的形態(tài)及大小對(duì)轉(zhuǎn)染效率也有不同的影響,，如前面提到的超螺旋及線性DNA對(duì)瞬時(shí)和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的影響。如果基因產(chǎn)物對(duì)細(xì)胞有毒性作用,，轉(zhuǎn)染也很難進(jìn)行,，因此選擇組成或可調(diào)控，強(qiáng)度合適的啟動(dòng)子也很重要,，同時(shí)做空載體及其它基因的相同載體構(gòu)建的轉(zhuǎn)染正對(duì)照可排除毒性影響的干擾,。

紅榮微再生物提供： PEI轉(zhuǎn)染試劑, ProteanFect轉(zhuǎn)染試劑盒，歡迎聯(lián)系我們咨詢~

以上信息由企業(yè)自行提供,，信息內(nèi)容的真實(shí)性、準(zhǔn)確性和合法性由相關(guān)企業(yè)負(fù)責(zé),，化工儀器網(wǎng)對(duì)此不承擔(dān)任何保證責(zé)任,。
溫馨提示：為規(guī)避購(gòu)買風(fēng)險(xiǎn)，建議您在購(gòu)買產(chǎn)品前務(wù)必確認(rèn)供應(yīng)商資質(zhì)及產(chǎn)品質(zhì)量,。

在線留言

細(xì)胞治療

耗材

細(xì)胞凍存/細(xì)胞分離

細(xì)胞庫(kù)

干細(xì)胞（無(wú)血清）培養(yǎng)基

血清及替代物/細(xì)胞因子

抗體/蛋白質(zhì)

核酸分析/測(cè)序/蛋白組學(xué)

小型儀器設(shè)備

檢測(cè)試劑

其他

微球

生長(zhǎng)因子/細(xì)胞因子

PCR試劑耗材

NGS測(cè)序試劑耗材

細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)質(zhì)量控制貼士