瞬時轉(zhuǎn)染（transient transfection）：指將構(gòu)建好的質(zhì)粒通過某種方式導(dǎo)入到哺乳動物細胞內(nèi),，該質(zhì)粒上的外源基因不整合到細胞自身的基因組上,。瞬時轉(zhuǎn)染的基因表達是快速且短暫的，通常只能維持幾天,。這種轉(zhuǎn)染方式主要用于快速檢測基因功能或蛋白質(zhì)表達,，例如了解基因沉默、抑制性RNA和小規(guī)模蛋白質(zhì)生產(chǎn)等,。

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染（Stable transfected）：將外源DNA整合到宿主細胞的基因組中,，這種整合過程需要更長時間和更復(fù)雜的操作。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染后的基因表達是長期且穩(wěn)定的,，因為外源基因會被傳遞給子代細胞,。這種轉(zhuǎn)染方式主要用于長期表達目標(biāo)基因的實驗，例如生產(chǎn)重組蛋白,、進行基因敲除或敲入等研究,。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染也用于藥物篩選、研究形態(tài)變化,、抗生素耐藥性等領(lǐng)域,。

細胞轉(zhuǎn)染通常可分為三類途徑分別為物理介導(dǎo),、化學(xué)介導(dǎo)和生物介導(dǎo),。

物理介導(dǎo)：電穿孔法、顯微注射和基因槍等

化學(xué)介導(dǎo)：如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法,、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法和多種陽離子物質(zhì)介導(dǎo)技術(shù)等

生物介導(dǎo)：病毒介導(dǎo),，逆轉(zhuǎn)錄病毒、腺病毒等

怎么選擇轉(zhuǎn)染試劑：

小編對這三個途徑的常用方法進行了總結(jié),，記得給小編點個收藏hahaha~

物理介導(dǎo)——電穿孔法

原理：電流能夠擊穿細胞膜形成瞬時的水通路或膜上小孔促使DNA分子進入胞內(nèi),。

優(yōu)點：原理簡單；不需要載體,。

缺點：需要特殊設(shè)備,，電流對細胞傷害非常大。

化學(xué)介導(dǎo)——脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染

原理：陽離子脂質(zhì)體表面帶正電荷,，與核酸的磷酸根通過靜電作用,，將DNA分子進行包裹，形成DNA脂復(fù)合物,，能被表面帶負電的細胞膜吸附,，再通過細胞內(nèi)吞進入細胞,。

優(yōu)點：操作比較簡單，轉(zhuǎn)染效率高,。

缺點：需要進行條件優(yōu)化,；有些細胞體系不易轉(zhuǎn)染；對血清敏感,；價格較高,。

化學(xué)介導(dǎo)——陽離子聚合物

原理：與脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染原理相似，都是利用陽離子與核酸結(jié)合成復(fù)合物,，利用細胞內(nèi)吞進入細胞內(nèi),。

優(yōu)點：在血清內(nèi)穩(wěn)定；對細胞毒性相對較低,；轉(zhuǎn)染率高,；性價比高。

缺點：需要對體系進行條件優(yōu)化,；有些細胞體系不易轉(zhuǎn)染,。

生物介導(dǎo)——病毒感染

原理：通過侵染宿主細胞從而將外源基因?qū)氲郊毎小?/p>

優(yōu)點：高轉(zhuǎn)染率；適用性廣,。

缺點：需要對體系進行條件優(yōu)化,；需要構(gòu)建病毒載體，步驟較為復(fù)雜,。

然而,，一種方法不會適用于所有的細胞和實驗，理想的轉(zhuǎn)染方法應(yīng)該根據(jù)自己的細胞類型和實驗需求來選擇,。合適的細胞轉(zhuǎn)染方法應(yīng)具有高轉(zhuǎn)染效率,，低細胞毒性和對正常生理學(xué)的影響最小，且易于使用和可重復(fù)性等特點,。

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