1.細菌：細菌污染常見的有大腸桿菌，葡萄球菌等,。細菌污染較易發(fā)現(xiàn),，在普通倒置顯微鏡下為黑色細沙狀，培養(yǎng)液一般會在短時間內變黃,，有時靜置的培養(yǎng)液不混,，稍加震蕩,，變會有很多混濁物漂起。顯微鏡下可見培養(yǎng)液中有大量圓球狀顆粒物漂浮,，有時在細胞表面及周圍有大量細菌存在,，細胞停止生長并有中毒表現(xiàn)。

處理：

在培養(yǎng)液中加入相應的抗生素,，能夠預防絕大多數(shù)的細菌污染

保證器皿,、水充分滅菌，空氣無菌,，同時保證滅菌壓力,。

2、霉菌：霉菌的污染多數(shù)是白色念珠菌,，曲霉菌,，酵母菌等。霉菌污染后培養(yǎng)液短期內依舊清亮不變渾濁,，倒置顯微鏡下可看見細胞之間有交錯的絲狀,，樹枝狀菌絲，漂浮在培養(yǎng)液中,。念珠菌呈卵圓狀,，在細胞周邊生長。細胞被霉菌污染后,，仍可生長,，長時間細胞的活力狀態(tài)會變差。

處理：先確定污染物的種類：細菌,、真菌還是支原體,。如果是霉菌污染。迅速將污染細胞與正常細胞系隔離,，并對實驗中所用過的所有器皿工具消毒

3,、支原體：支原體的大小介于細菌和病毒之間，是一種獨立生活的微生物,。對熱敏感,，對一般抗生素不敏感。支原體的形態(tài)多變,，多吸附在細胞表面和細胞之間,。電鏡下觀察，中心有高密度的密集顆粒,，橫斷面與細胞微絨毛相似,。

因國內的血清很多數(shù)都沒有做支原體陰性檢測，而支原體又是牛血清中最常見的微生物之一。支原體污染細胞后,，培養(yǎng)液輕微發(fā)生混濁．但細胞變化不顯著,，在細胞逐漸的培養(yǎng)中，細胞會慢慢死亡,。

支原體污染檢測：

熒光染色法：DNA和與DNA特異性結合的熒光染料結合,，使得支原體的DNA著色，然后用熒光顯微鏡觀察,。鏡下支原體為散在于細胞同圍或附于細胞膜表面的亮綠色小點,。

解決：

1.抗生素排除法：支原體污染預防比解決好。如果不小心污染后,，可加入高濃度抗生素（常規(guī)使用的5倍濃度）作用24-48小時,，再換入常規(guī)培養(yǎng)液，但該法不保證有效,。推薦用量：慶大霉素200ug/ml,四環(huán)素10ug/ml,，卡那霉素50ug/ml。

2.加溫除菌：支原體不耐熱,，可以對支原體污染的細胞熱處理除菌,。將支原體污染的細胞放置41度中作用10小時可殺死支原體。因高溫對細胞本身也會產生一定影響,，故熱處理前需先進行預實驗,，確定對細胞影響最小而能大程度的殺死支原體的時間。

4,、黑蛟蟲：黑膠蟲污染后細胞中出現(xiàn)小黑點,，高倍鏡下可看見不規(guī)則的運動,。培養(yǎng)液渾濁不明顯,，對細胞生長狀態(tài)無太大影響。

解決：如果細胞出現(xiàn)黑膠蟲污染,，可增加細胞的接種密度,，提高細胞存活率。當細胞生長狀態(tài)很好時,，黑膠蟲的數(shù)量會降低,。細胞培養(yǎng)過程中堅持要每天換液，并用緩沖液沖洗,，能夠大大降低黑膠蟲的數(shù)量,，可最終消失，偶爾在鏡下可見個別小黑點,，但整體細胞培養(yǎng)和后續(xù)的細胞轉染無影響,。

細胞培養(yǎng)箱染菌清洗方法

用硫酸銅溶液擦拭CO2孵箱內，再把水盤里也加上飽和量的硫酸銅,?；蛘咴谂囵B(yǎng)箱的托盤加入飽和的消毒磷酸氫二鈉高鹽液體,可以防止霉菌污染,。

CO2孵箱被霉菌污染后，可把所有細胞暫時轉移,，采用過氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板,，箱壁）。并把過氧乙酸放置在孵箱內一個小時,，使其蒸汽彌漫,。待過氧乙酸的氣味消散后，再移入細胞,。孵箱應定期清潔（2月左右）,。

其它培養(yǎng)箱清洗方法是：用84液擦洗－清水擦洗－75%酒精擦洗－紫外燈照。

預防霉菌污染,，可在培養(yǎng)基里加3u/ml的兩性霉素或制霉菌素或放線或雙抗,；但細胞一旦污染，制霉菌素或放線或雙抗都無法彌補,，舍棄被污染細胞,，并將環(huán)境*消毒。如果所有細胞都污染,，可能是整體系統(tǒng)污染,，檢查所有培養(yǎng)基和器材，并重新滅菌,。針對個別污染,，首先考慮操作問題，注意操作規(guī)范,。

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