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動物細(xì)胞培養(yǎng)需要的一些特殊條件
閱讀:4332發(fā)布時間:2022-2-16
①加胎牛血清培養(yǎng)基:
動物細(xì)胞離體培養(yǎng)常常需要血清。各種細(xì)胞合成培養(yǎng)基(如MEM,、RPMll640,、DMEM)只提供細(xì)胞生長所需的各種基礎(chǔ)營養(yǎng)物質(zhì),包括碳水化合物,、氨基酸,、無機鹽、維生素等,。血清提供生長必需因子,,如激素、微量元素,、礦物質(zhì)和脂肪,。根據(jù)不同細(xì)胞的需求,一般含有10%~20%的血清培養(yǎng)基即可維持細(xì)胞較快的生長增殖速度,。
②無菌環(huán)境:
無毒和無菌是體外培養(yǎng)細(xì)胞的首要條件,。使用的各種試劑和耗材要經(jīng)過高壓或紫外線滅菌。嚴(yán)格的無菌操作是養(yǎng)好細(xì)胞的必要前提,。為防止細(xì)胞受到微生物感染,,可在培養(yǎng)基中加入雙抗。
③溫度和氣體環(huán)境:
一般動物細(xì)胞在體外培養(yǎng)的適宜溫度是37℃,,不適宜的環(huán)境溫度會影響細(xì)胞的生長甚至死亡,。二氧化碳和氧氣的比例要在細(xì)胞培養(yǎng)過程中不斷進(jìn)行調(diào)節(jié),一般維持在5%,。二氧化碳既是細(xì)胞的代謝產(chǎn)物,,又與維持培養(yǎng)液的pH密切相關(guān)。
如何防控污染:保持良好的操作習(xí)慣,,超凈臺要紫外滅菌30min,,以70%的乙醇擦拭無菌操作臺,開啟超凈臺風(fēng)扇運轉(zhuǎn)數(shù)分鐘后,,才開始實驗,。
每次只處理一種細(xì)胞,以免失誤混淆或細(xì)胞間污染,,操作不要觸碰吸管尖頭部或容器口等,。
像對待孩子一樣養(yǎng)細(xì)胞,它很脆弱,,最好每天關(guān)注一下,,以免出現(xiàn)培養(yǎng)箱缺二氧化碳,停電,、溫度不夠等現(xiàn)象,。
避免全軍覆沒,好細(xì)胞要及時保存,有備用的細(xì)胞,,這樣即使有細(xì)胞污染還可以有備用的細(xì)胞頂上,,不至于太惱火,好習(xí)慣要保持,。
不同細(xì)胞喜好不同,,需要在培養(yǎng)中慢慢體會,例如平滑肌細(xì)胞比較好長,,2-3天可能就會有很多細(xì)胞,,應(yīng)該算是比較好養(yǎng)活的;內(nèi)皮細(xì)胞分泌物較多,,需要時不時換洗才會長的好等等,。
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