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加入蛋白酶抑制劑以防止蛋白質(zhì)的降解
閱讀：3479發(fā)布時間：2022-1-5
蛋白相關(guān)的檢測中,，首先最關(guān)鍵的一步便是蛋白質(zhì)的提取,。蛋白質(zhì)的提取過程中,，蛋白水解酶就會被釋放出來或被激活，影響最終的結(jié)果,。
為了避免這些情況的出現(xiàn),，可以在樣品制備時盡可能低溫下進行。此外,，許多蛋白酶在pH9以上就失活了,，因此Tris-base，碳酸鈉或堿性載體兩性電解質(zhì)往往能抑制蛋白水解,。
但是有些蛋白酶在上述條件下仍然保持著活性,，此時，我們可以通過加入各種蛋白酶抑制劑以防止蛋白質(zhì)的降解,。
根據(jù)催化中心結(jié)構(gòu)的不同蛋白酶可分為以下4類：
1,、絲氨酸蛋白酶
在其活性中心含有絲氨酸和組氨酸，如糜蛋白酶,、彈性蛋白酶,、血纖維蛋白溶酶、凝血酶,、枯草桿菌蛋白酶,、胰酶等,。
2、半胱氨酸蛋白酶(又稱硫醇或SH蛋白酶)
在其催化中心含有半胱氨酸,，如鈣蛋白酶,、組織蛋白酶B/C/L、木瓜蛋白酶等,。
3,、天(門)冬氨酸蛋白酶(羧基蛋白酶)
在其活性中心含有天(門)冬氨酸，如組織蛋白酶D,、木瓜蛋白酶,、腎素等。
4,、金屬蛋白酶
在其催化中心含有金屬離子,，如氨基肽酶、羧基蛋白酶A/B,、嗜熱菌蛋白酶等,。
除了蛋白酶抑制劑以外，在許多研究過程中,，尤其是一些制藥公司和研究院所在研究藥理學(xué)機理的時候,，需要了解蛋白磷酸化途徑，因此一個重要的步驟就是準確的觀察一般和特異的磷酸化狀態(tài),，所以蛋白抽提的另一個重要保護過程就是對磷酸化狀態(tài)的有效保護,。
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